磁隧道结生物传感器竞争免疫检测体系的研究

来源 :中国科学院研究生院 中国科学院大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:Tiramisu_smile
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食品安全在我国存在着严峻和突出的问题,已成为民众关注的焦点。其中,食品中兽药残留问题已引起人们的广泛关注。为解决一些现有常规技术达不到对多残留物同时、快速、准确检测的问题,建立新型的多靶标检测方法已成为目前的研究热点。   本论文以解决食品中药物残留快速检测问题为出发点,以磁隧道结(MagneticTunnelJunction,MTJ)生物传感器为平台,以常见的两种兽药(氯霉素、盐酸克伦特罗)为检测物,建立了多靶标的磁标记竞争免疫定量检测方法,实现了快速、准确、特异和多靶标的定量检测,与常规的HPLC(HighPerformanceLiquidChromatography)法及ELISA(EnzymeLinkedImmunosorbentAssay)法相比,本方法具有检测条件温和、快速、检测范围宽、高通量、操作自动化的优势。本论文研究成果为MTJ生物传感器在食品安全领域的广泛应用奠定了基础。主要研究内容包括以下几方面。   1、磁标记竞争免疫反应流程的建立。   在模拟芯片——硅片上采用点样方式,利用荧光显微镜观察硅片上免疫竞争反应后的磁颗粒密度,初步优化出氯霉素(Chloramphenicol,CAP)及盐酸克伦特罗(Clenbuterolhydrochloride,CL)的磁标记竞争免疫检测条件:抗原的固定方法、固定浓度、反应时间等。建立了静态的磁标记竞争免疫反应流程和反应条件。   2、两种兽药的微流体反应条件优化。   以CAP为靶标,将检测结果的稳定性及磁颗粒分布均匀程度作为评价指标,优化微通道中反应的最佳加样速度及冲洗速度,为MTJ生物传感器中建立两种兽药的检测工作曲线建立基础。   3、MTJ生物传感器检测两种兽药的标准曲线的建立。   在MTJ生物传感器中,通过优化两种兽药的抗原固定浓度及抗体反应浓度,建立了CAP及CL工作曲线,检测时间仅为25min,两种兽药的最低检出限可达0.05μg/L,最高检测限可至100μg/L。   4、兽药残留检测的方法学评价及样品检测。   采用上述建立的方法检测牛奶中CAP残留,平均加标回收率为100.54%~103.08%(n=6),批内精密度为1.17%~2.08%(n=6),批间精密度为0.84%~2.36%(n=4),与ELISA方法的一致相关系数达到0.98;检测CL的平均加标回收率为97.59%~98.09%(n=6),批内精密度为2.61%~2.74%(n=6),批间精密度为0.79%~1.77%(n=4),与ELISA方法的一致相关系数达到0.96。研究结果显示建立的磁标记竞争免疫检测方法具有良好的重复性和重现性。选择链霉素、盐酸异丙肾上腺素为干扰物进行交叉反应实验,结果显示上述方法具有良好的特异性。
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