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目的：I型人免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus type I，HIV-1)侵入靶细胞的过程是由病毒表面的包膜糖蛋白(envelope glycoprotein，Env)介导的复杂动态过程。模拟HIV-1感染细胞与靶细胞膜融合的细胞-细胞融合实验体系可用于研究HIV包膜功能、HW介导细胞融合的机制及筛选抗HIV药物等。本研究拟建立安全、稳定、敏感的融合实验体系将为针对HIV-1包膜的研究以及抗HIV-1药物筛选奠定基础。
方法：通过将HW-1 env和tat表达质粒共转染293T细胞瞬时表达Env和Tat，将表达HIV Env与Tat的293T(Env-293T)细胞与表达HIV-1受体和辅助受体并携带萤火虫荧光素酶报告基因(fLuc)的TZM-b1细胞共同培养，两种细胞经HIV-1 Env介导发生融合，融合后，通过检测fLuc的活性来反映融合程度。并对细胞数、融合时间等融合条件进行优化。利用所构建的细胞融合体系观察了炎症因子凝血酶(thrombin，Th)对HIV-1 Env介导的细胞融合的影响。
结果：1)HIV-1 Env蛋白成功在293T细胞表面表达；2)优化条件如下：Env-293T细胞数为1×103～4×103、TZM-b1细胞数为2×103、融合时间为14～18h时，获得稳定、可重复、能精确定量的融合；3)融合实验结果证明，Th能够增强HIV-1R5亲嗜性毒株JR-FL、ADA和06057c3 Env介导的融合，且增强作用为浓度依赖性。
结论：1)建立了一个新的安全、敏感、准确的HIV-1 Env介导的细胞.细胞融合体系。2)凝血酶能够增强由R5嗜性HIV-1 Env介导的融合。