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背景：人GRP78，属于热休克蛋白70(HSP70)家族，它是唯一定位在内质网上的蛋白质。在热休克蛋白70家族里GRP78是最早被认定与已知配体有特殊关系的基本物质。GRP78是广泛存在于各种生物中的一种内质网的分子伴侣，是促进正常生长状态下细胞蛋白质成熟、维系细胞功能和生命的关键性调节物质。 目的：构建GRP78原核表达重组质粒pW28-GRP78，在大肠杆菌BL21中表达并纯化获得GRP78蛋白质，初步检测其ATP酶活性及其与preS1的结合能力，并培养获得GRP78蛋白质晶体，收集X-光晶体衍射数据，为其三维结构解析提供重要的实验基础。 方法：1）通过NCBI数据库得到GRP78基因序列，PCR扩增获得GRP78基因片段，并插入到带有His标签的载体pW28中，构建重组质粒pW28-GRP78，然后转入大肠杆菌BL21中进行表达，利用镍离子亲和层析纯化目的蛋白。利用晶体筛选试剂盒对GRP78蛋白质进行晶体筛选，对初步筛选得到的晶体进行优化，以获得高质量的单晶，通过X-光衍射技术收集单晶的衍射数据。 2) HSP70家族在N端有44-kDa的ATP酶结构域。利用ATP酶活性检测试剂盒对GRP78进行ATP酶活性检测，并检测GRP78蛋白浓度、反应温度对GRP78蛋白ATP酶活性的影响。 3) PCR扩增获得preS1基因片段，并插入到带有GST标签的载体pGEX-6P-1中，构建重组表达质粒pGEX-6P-1-preS1，将重组表达质粒，转入大肠杆菌BL21中进行表达;用谷胱甘肽琼脂糖凝胶亲和层析柱（Glutathione-Sepharose-4B层析柱）纯化目的蛋白，利用SDS-PAGE分析GRP78与preS1体外相互作用情况。 结果：1）GRP78蛋白在大肠杆菌BL21中获得大量上清表达，并成功纯化了目的蛋白;2）通过GRP78蛋白质晶体的初筛和优化得到高质量单晶;3）ATP酶活性检测实验发现GRP78具有ATP酶活性，其酶活性与GRP78蛋白浓度、反应温度有关;4）体外相互作用实验发现GRP78与preS1发现两种蛋白能在体外结合。 结论：GRP78是HepG2细胞膜上与HBV包膜蛋白preS1区域结合的蛋白。通过本课题的研究，为继续深入探索GRP78的晶体结构和乙型肝炎病毒的肝细胞膜受体进而揭示HBV的入侵机制打下了基础。