雪灵芝皂甙的提取纯化及抗氧化活性研究

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雪灵芝(Areneria Kensuensis Marim var ova Tipetala Tsui,A.K)又名草灵芝,为高原野生植物,学名卵瓣蚤缀,属石竹科蚤缀属,为多年生垫状草本植物。本文以雪灵芝全草为原料,研究了雪灵芝中皂甙化合物的提取与纯化工艺。运用化学分析、色谱、光谱及质谱等仪器和分析方法,对雪灵芝中皂甙化合物的含量测定、结构推析及生物活性进行了初步研究。主要研究结果如下:1雪灵芝皂甙定量分析方法的确立采用国标中相关方法对雪灵芝全草的主要成分进行分析,其中水分含量为8.61%,灰分3.93%,粗蛋白7.06%,粗脂肪1.93%,总糖10.79%,还原糖7.28%。定性分析结果表明雪灵芝中含有三萜类皂甙。选用紫外-可见分光光度法测定雪灵芝皂甙含量。对照品选用人参皂甙Rb1(Ginsenoside Rb1,GRb1),以5%香草醛-冰醋酸溶液和高氯酸作为显色体系,经紫外扫描确定550mm为最大吸收波长。所得标准曲线方程为:Y=4.395X-0.0012,相关系数R2=0.9993,平均加标回收率为102.71%(RSD=1.032%);试验从稳定性、精密度和重现性几方面对测定方法的可靠性进行验证,结果表明该测定方法稳定可靠,重现性好,且操作简便快捷。2雪灵芝皂甙提取工艺条件的优化通过考察了提取液浓度、时间、温度和料液比四个单因素对雪灵芝总皂甙提取得率的影响,结合四元二次回归通用旋转组合设计,确定出提取的最佳工艺条件是:提取时间4.78~5.22h、提取温度77.9~82.8℃、乙醇浓度68.5~73.3%、固液比1:38.4~1:42.9。在此条件下,雪灵芝总皂甙提取得率可达1.47%。3雪灵芝皂甙纯化方法的研究及其结构初探研究大孔吸附树脂对雪灵芝皂甙分离纯化的影响,通过对7种大孔吸附树脂对雪灵芝总皂甙静态吸附和解吸附能力的比较,并对AB-8型大孔树脂的动态吸附特性进行了研究。最佳纯化工艺参数为:上样液浓度4.32 mg/mL,pH 6.0,上样流速2 BV/h,洗脱剂为60%乙醇溶液,2 BV/h流速进行洗脱,所得产品含量可达79.47%。采用薄层色谱、红外、电喷雾质谱等分析手段,对雪灵芝皂甙化合物进行结构分析,推测该化合物可能为三糖型原人参二醇皂甙的同分异构体。4雪灵芝皂甙抗氧化活性研究采用化学发光法考察雪灵芝皂甙TS和TS2的抗氧化活性及对DNA损伤的保护作用,结果表明雪灵芝皂甙TS和TS2都具有清除超氧阴离子、羟基自由基、过氧化氢和抑制DNA损伤作用减弱的能力。通过化学模拟体系体外和体内抗氧化试验表明,雪灵芝皂甙TS和TS2具有抑制小鼠红细胞溶血,抑制小鼠肝组织匀浆丙二醛(MDA)的生成和肝线粒体肿胀度的作用,能提高小鼠血清SOD和GSH-Px活力,并减少肝组织MDA的生成。
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