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目的:在TRP超家族中,TRPV5和TRPV6是唯一已知的钙离子高选择性通道,因此,本实验通过观察结肠癌SW480细胞TRPV5和TRPV6通道蛋白的表达,并改变TRPV5和TRPV6通道的功能状态,以观察对结肠癌SW480细胞内Ca2+浓度及SW480细胞生长、凋亡的调节作用。旨在研究TRPV5、TRPV6对结肠癌SW480细胞生物学行为的影响,为进一步研究TRPV5、TRPV6在结肠癌的诊断和治疗提供理论依据和实验基础。方法:(1)采用实时荧光定量PCR技术、Western-Bolt技术及细胞免疫组化技术,检测TRPV5/TRPV6激动剂1,25(OH)2D3(10-8mol/l)和Ca Cl2(10mmol/l)以及其抑制剂Cu Cl2(100μmol/l)对结肠癌SW480细胞中TRPV5m RNA、TRPV6m RNA及蛋白含量表达的比较。(2)通过激动剂及抑制剂改变TRPV5和TRPV6通道的功能状态后,用高速离子成像系统观察TRPV5/TRPV6对结肠癌SW480细胞内Ca2+的浓度变化;(3)对结肠癌SW480细胞进行同步化处理后,采用细胞增殖实验(MTT比色法)、细胞迁移实验(划痕修复法)及细胞凋亡实验(生化检测Tunel法),观察激动剂1,25(OH)2D3和Ca Cl2以及抑制剂Cu Cl2对结肠癌SW480细胞增殖、迁移、凋亡的影响。结果:(1)TRPV5m RNA、TRPV6m RNA及蛋白含量在激动剂1,25(OH)2D3组及Ca Cl2组较对照组表达明显增高(P<0.05);抑制剂Cu Cl2组较对照组表达明显降低(P<0.05);激动剂1,25(OH)2D3组与Ca Cl2组比较无明显差异(P>0.05);激动剂1,25(OH)2D3组和Ca Cl2组TRPV5m RNA、TRPV6m RNA及蛋白含量明显增高,与抑制剂Cu Cl2组比较差异有显著性(P<0.01);(2)在激动剂1,25(OH)2D3作用下,结肠癌SW480细胞内Ca2+的浓度较对照组增加(P<0.05);在抑制剂Cu Cl2作用下,结肠癌SW480细胞内Ca2+的浓度较对照组降低(P<0.05);(3)激动剂1,25(OH)2D3和Ca Cl2对结肠癌SW480细胞有促增殖、迁移及抑制凋亡作用(P<0.05),并呈浓度时间依赖性;抑制剂Cu Cl2对结肠癌SW480细胞有抑制增殖、迁移及诱导凋亡作用(P<0.05),并呈浓度时间依赖性。结论:(1)激动剂1,25(OH)2D3和Ca Cl2能使结肠癌SW480细胞中TRPV5m RNA、TRPV6m RNA及蛋白的表达上调;使结肠癌SW480细胞内Ca2+浓度增加,促进结肠癌SW480细胞增殖、迁移及抑制其凋亡。(2)抑制剂Cu Cl2能使结肠癌SW480细胞中TRPV5 m RNA、TRPV6m RNA及蛋白的表达下调;使结肠癌SW480细胞内Ca2+浓度降低;抑制结肠癌SW480细胞增殖、迁移及诱导其凋亡。(3)TRPV5、TRPV6在结肠癌SW480细胞中均有表达,但以TRPV6较明显。TRPV5、TRPV6通道蛋白表达的变化,可能通过增加或降低细胞内Ca2+含量,进一步调节结肠癌SW480细胞生物学行为。