【摘 要】
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研究目的:血小板生成素(TPO)是哺乳动物调节血小板生成的主要细胞因子,具有刺激巨核细胞集落生成的功能.体外实验表明,TPO既可以促进早期巨核细胞分化,如形成巨核细胞集落形
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研究目的:血小板生成素(TPO)是哺乳动物调节血小板生成的主要细胞因子,具有刺激巨核细胞集落生成的功能.体外实验表明,TPO既可以促进早期巨核细胞分化,如形成巨核细胞集落形成单位,也可作用于晚期巨核细胞的成熟,如影响巨核细胞的数目、大小及形态.同时,TPO可协同IL-3或干细胞因子刺激巨核细胞集落形成,但对红系和粒—单系细胞集落的形成影响很小.动物体内实验证实,注射TPO后,骨髓巨核细胞集落形成单位(CFU-M)增加,外周血小板计数与TPO注射剂量呈正相关.由于TPO对血小板减少症的良好疗效,其基因工程研究已经成为国内外研究的热点.为了深入研究TPO的体内分布、代谢和生物学功能及制备TPO单克隆抗体,我们采用RT-PCR技术获得了成熟TPO的全长cDNA并进行了其在原核系统表达的研究;同时,制备动物模型,研究重组人TPO对血小板减少症小鼠血小板生成的影响;Iodogen法标记重组人TPO蛋白,探讨TPO在动物体内的分布规律;此外,还构建了重组人TPO昆虫杆状病毒表达载体.结论:1.该研究成功地构建了重组克隆质粒pMD18-T-TPO和重组表达质粒pQE30-TPO,并对重组TPO蛋白进行了初步纯化.2.用<125>I成功标记了重组蛋白rhTPO,研究其在小鼠体内的代谢、分布,结果显示<125>I-rhTPO在富含骨髓的骨组织中高分布,提示骨髓是TPO作用的靶组织.3.成功制备了小鼠血小板减少模型,证实了rhTPO的促血小板生成作用.4.构建了重组人TPO杆状病毒表达载体,为进一步研究rhTPO在昆虫细胞中的表达奠定了实验基础.
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