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分别选择N离子束注入、He-Ne激光和Co60γ-射线三种诱变剂对出发菌株PenicilliumdecumbensA10进行诱变处理,比较三种诱变剂的诱变效果,最终选中Co60γ-射线为最佳诱变剂,最佳诱变剂量为450Gy,经过平板初筛和摇瓶复筛,从中筛选到一株纤维素酶高产菌株A50,CMC酶活力和滤纸酶活力分别为25.33U/mL、1.81U/mL,比出发菌株分别提高了23.7%和33.13%。转管8次后产酶稳定性良好。
经培养基优化后,得出A50产酶的最佳条件为:主碳源浓度5%、麸皮与玉米秸秆的比例为1∶1、辅加碳源为0.1%的葡萄糖、辅加氮源为0.2%的磷酸氢二铵、培养基初始pH为5.0、300mL三角瓶的装液量为30mL、接种量10%、Tween-80添加量为0.1%、培养温度为32℃、摇床转速200rpm。培养至60h时,CMC酶活和滤纸酶活均达到最高,分别为27.28U/mL和1.98U/mL,较出发菌株A10分别提高了33.2%和45.59%。
对出发菌株A10和突变株A50的发酵液进行SDS-PAGE研究发现,二者的蛋白种类明显不同,后者蛋白条带明显要多于前者,从蛋白质水平上证明了突变株A50确实是PenicilliumdecumbensA10在遗传物质上发生改变的菌株。
突变株A50CMC酶活的最适作用pH值为4.0,而滤纸酶活的最适作用pH值为5.2;不同pH值下40℃保温2h后,突变株A50CMC酶活在pH3.6~6.0之间稳定性较好,而滤纸酶活在pH4.0~6.0之间酶活力较稳定,残存酶活都在80%以上。
突变株A50CMC酶活的最适作用温度为45℃,而滤纸酶活的最适作用温度为60℃;不同温度下保温1h后,突变株A50的CMC酶活和滤纸酶活在30℃到45℃之间都较稳定,到50℃后酶活都急剧下降,到70℃时酶活力仅残存20%左右。