论文部分内容阅读
目的:本文对弱光泽灵芝的抗炎活性部位进行化学成分研究,并测定灵芝三萜化合物的抗炎活性,为进一步阐明弱光泽灵芝对神经保护功效的物质基础提供理论依据。方法:综合运用硅胶柱色谱、反相ODS柱色谱、SephadexLH-20柱色谱及制备液相等手段对弱光泽灵芝子实体85%乙醇提取物的化学成分进行研究,通过理化性质和现代波谱学手段对单体化合物进行结构鉴定。采用脂多糖(LPS)诱导小鼠小胶质细胞BV-2释放一氧化氮(NO)细胞模型,选用MTT法检测化合物对细胞存活率的影响,Griess法检测培养液中NO2-含量,研究弱光泽灵芝三萜类化合物体外抗炎活性。结果:从弱光泽灵芝子实体850%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位中分离得到34个化合物,分别是:3β，12β-dihydroxy-7,11,15,23-tetraoxo-lanost-8,20-dien-26-oic acid(1),15α-hydroxy-3,11,23-trioxo-lanost-8,20-dien-26-oic acid(2),12β-acetoxy-3,7,11,15,23-pentaoxo-lanost-8,20-dien-26-oic acid(3),3,7,12-trihydroxy-11,15,23-trioxo-lanost-8,20-dien-26-oic acid(4),3,7,15-trihydroxy-4-(hydroxymethyl)-11,23-dioxo-lanost-8-en-26-oic acid(5),灵芝醇B(6),灵芝酸C2(7),灵芝三醇(8),灵芝酮三醇(9),methyl lucidenate L(10),灵芝酸 C6(11),灵芝酸 G(12),灵芝酸 B(13),灵芝酸D(14),灵芝酸D(15),灵芝酸A(16),7β,12β-dihydroxy-3,11,15,23-tetraoxo-5α-lalaosst-8-en-26-oic acid(17),灵芝酸H(18),灵芝烯酸A(19),灵芝酸E(20),ganolucidic acidA(21),灵芝酸1(22),甲基灵芝酸A(23),3β,15α-dihydroxy-7,11,23-trioxo-lanost-8-dien-26-oic acid(24),灵芝酸 F(25),灵芝酸烯K(26),20-羟基灵芝酸G(27),12β-acetoxy-3β-hydroxy-7,11,15,23-tetraoxo-lanost-8,20E-diene-26-oic acid(28),灵芝酸 K(29),麦角甾(30),Ergosta-7,22-dien-3β-ol(31),过氧麦角甾(32),6,9-epidioxyergosta-7,22-dien-3β-ol(33),甘草素(34)。这34个化合物中,包括29个三萜类化合物,4个甾体类化合物和1个黄酮类化合物,其中化合物1为新化合物,化合物2～5共4个化合物为首次从灵芝属中分离得到。采用BV-2小胶质细胞测定了 27个灵芝三萜类化合物的NO释放抑制活性,结果显示26个灵芝三萜类化合物对BV-2小胶质细胞的存活率无影响,均能较好的抑制LPS诱导的BV-2小胶质细胞释放NO,其中化合物4、5、12、17、19、20、23、24、29的IC50低于10μM,明显抑制LPS诱导的BV-2小胶质细胞中NO的释放。结论:从弱光泽灵芝乙醇提取物的乙酸乙酯部位分离得到29个三萜类化合物,其中9个三萜化合物对LPS诱导的BV-2小胶质细胞释放NO有明显的抑制作用,表明三萜类成分可能是弱光泽灵芝抗炎、神经保护作用的主要活性成分。