【摘 要】
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目的:本实验通过构建成骨细胞中特异性敲除Prmt5小鼠拔牙窝模型,探讨Prmt5对小鼠拔牙窝愈合中的影响,为临床中促进拔牙窝愈合提供线索。方法:1.检测Prmt5在拔牙窝愈合过程中的表达。选取6-8周龄C57BL/6小鼠行双侧上颌第一磨牙拔除术。在拔牙术后第3天、7天、10天、14天、21天、28天、35天取材,通过Western Blot检测拔牙窝愈合中PRMT5的表达。2.构建条件基因敲除小鼠
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目的:本实验通过构建成骨细胞中特异性敲除Prmt5小鼠拔牙窝模型,探讨Prmt5对小鼠拔牙窝愈合中的影响,为临床中促进拔牙窝愈合提供线索。方法:1.检测Prmt5在拔牙窝愈合过程中的表达。选取6-8周龄C57BL/6小鼠行双侧上颌第一磨牙拔除术。在拔牙术后第3天、7天、10天、14天、21天、28天、35天取材,通过Western Blot检测拔牙窝愈合中PRMT5的表达。2.构建条件基因敲除小鼠模型。将Prmt5fl/fl（对照组）与OC-Cre转基因小鼠交配,获得OC-Cre;Prmt5fl/fl小鼠（实验组）,行基因型鉴定。3.于6-8周龄拔除对照组及OC-Cre;Prmt5fl/fl小鼠上颌第一磨牙,建立拔牙窝模型,并在拔牙术后第3天、7天、10天、14天、21天、28天、35天取材。称量小鼠体重,在小鼠处死前3h以10μl/g剂量,腹腔注射5-溴脱氧尿嘧啶核苷（5-bromodeoxyuridine,Brdu）（浓度10mg/ml）。对拔牙窝进行Micro-CT扫描,通过影像学对拔牙窝进行大体表型分析。通过石蜡切片及Masson染色,对拔牙窝骨形成进行组织学分析。通过免疫荧光染色检测拔牙后3天、7天、14天骨形成阶段细胞的细胞分化、增殖、凋亡。结果:1.Western blot检测结果显示在拔牙窝愈合过程中,PRMT5的表达在拔牙后1-14天逐渐升高,之后逐渐恢复至拔牙前水平,提示Prmt5在拔牙窝愈合前期可能发挥作用。2.通过免疫组化检测确认成骨细胞中Prmt5敲除。OC-Cre;Prmt5fl/fl小鼠的体型较对照组小,但差异不明显。3.与对照组小鼠相比,OC-Cre;Prmt5fl/fl小鼠拔牙窝愈合延缓。Micro-CT分析Prmt5敲除小鼠拔牙窝较同时间点对照小鼠拔牙窝愈合延迟,新生骨骨密度较低,骨小梁结构较稀疏。通过3D重建后进一步分析骨分析参数,发现拔牙后0-14天,骨体积分数（BV/TV）、骨密度值（BMD）、骨小梁数量（Tb.N）、骨小梁厚度（Tb.Th）、骨小梁分离度（Tb.Sp）和骨小梁模式因子（TBPf）差异明显。Masson染色结果与Micro-CT结果一致。对照组小鼠拔牙窝牙槽嵴高度、骨小梁数量、厚度及明显高于Prmt5敲除小鼠。因此,选用3天、7天、14天进行细胞学分析。通过免疫组化检测成骨细胞标物N-cadherin和Sp7,发现Prmt5敲除小鼠成骨细胞数量减少。后通过Brdu（5-溴脱氧尿嘧啶核苷）法细胞增殖实验发现Prmt5敲除小鼠的细胞增殖较对照组增加。通过检测细胞凋亡发现Prmt5敲除小鼠细胞凋亡较对照组增加。结论:成骨细胞中PRMT5可能通过促进成骨细胞分化,减少细胞凋亡,参与拔牙窝愈合。
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