【摘 要】
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本论文主要将研究集中在对粟酒裂殖酵母中发现的一新种boxH/ACAsnoRNAsnR90在核糖体25S上的假尿嘧啶化修饰作用的讨论。粟酒裂殖酵母核糖体大亚基上的25S是主要的肽转移
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本论文主要将研究集中在对粟酒裂殖酵母中发现的一新种boxH/ACAsnoRNAsnR90在核糖体25S上的假尿嘧啶化修饰作用的讨论。粟酒裂殖酵母核糖体大亚基上的25S是主要的肽转移场所,其修饰位点的研究对了解粟酒裂殖酵母核糖体结构及功能的实现均有极大的意义。根据对编码snR90snoRNA的基因分析表明,snR90基因位于一个非编码RNA基因的外显子中,该非编码RNA基因的内含子中还存在一个boxC/D类snoRNA(snR80)基因,是一个十分具有研究价值的基因;再对snR90的结构进行分析判断估计该分子上应该存在两个假脲嘧啶化修饰位点。利用遗传手段,以一个选择性标记基因Kanr将snR90snoRNA基因交换出来,对snR90snoRNA的基因进行敲除(knockout),成功构建了基因缺失株△snR90。通过选择培养基初步筛选,然后利用双引物PCR筛选出正确重组的成功缺失株,再对野生性与缺失株中提取的总RNA分别利用Northern杂交鉴定,既确定snR90snoRNA在粟酒裂殖酵母中的稳定表达,又可进一步确定snR90snoRNA基因缺失株△snR90的成功构建。同时用野生株和缺失株做CMC-引物延伸实验,分别验证由snR90在核糖体25S上指导的假尿嘧啶化的两个精确的修饰位点。最后通过用五个浓度梯度的接种量在23℃、30℃、37℃三个温度梯度下,分别在含有抗生素G418与不含的普通培养基中的对比生长培养得出缺失型菌株的生长情况差异进一步了解snR90对粟酒裂殖酵母生长的影响作用。实验表明,即使在同一非选择培养基中培养的酵母,其基因缺失株的生长亦明显较野生型缓慢。
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