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目的:通过动物实验和细胞实验方法,观察普拉梭菌(Faecalibacterium prausnitzii,F.prausnitzii)上清对葡聚糖硫酸钠(Dextran sulfate sodium,DSS)诱导的溃疡性结肠炎(Ulcerative Colitis,UC)小鼠Th17细胞分化影响和淋巴细胞功能相关抗-1(Leukocyte function associated antigen-l,LFA-1)基因在 UC 发病中的作用,初步探讨F.prausnitzii上清治疗UC的机制。方法:雄性LFA-1-/-和野生(C57BL/6J)小鼠各30只分别随机分为对照组(control group)、模型组(model group)、治疗组(treatment group),每组10 只。采用小鼠自由饮用DSS溶液的方法建立UC模型,对照组和模型组在造模的第三天开始用培养基灌胃,治疗组用 F.prausnitzii上清灌胃。每天观察各组小鼠体重的变化和疾病活动指数(Disease activity index,DA1)。造模第8天处死小鼠,观察结肠组织病理变化,进行病理学评分,ELISA检测外周血浆白细胞介素(Interleukin)-17、IL-6 和 IL-4 水平,流式细胞学(Flow cytometry,FCM)检测脾脏和肠系膜淋巴结(Mesenteric lymph nodes,MLN)Th17细胞的比例,免疫组化染色测定结肠维甲酸相关孤儿核受γt(Retinoic acid-related orphan receptorγt,RORyt)和 IL-17A 蛋白的表达,PCR 测定结肠IL-17A mRNA、IL-6 mRNA、RORyt mRNA、Toll 样受体 2(Toll-like receptor 2,TLR2)mRNA 的表达。体外实验:提取LFA-1-/-和野生UC模型小鼠的脾细胞,用磁珠分选方法分离出naive CD4+T细胞,分为PBS对照组、培养基对照组、1/5倍F.prausnitzii上清组、1/2倍 F.prausnitzii上清组和1倍F.prausnitzii上清组,培养第3天观察各组Th17细胞分化的比例,培养上清IL-17、IL-6和IL-4水平,并检测培养细胞RORyt mRNA 和 TLR2 mRNA 的表达。结果:相对于野生模型组,LFA-1-/-UC模型组小鼠DAI指数(2.20±0.593 vs 3.06±0.564,P<0.01)、结肠病理损伤评分(5.3±1.253 vs 7.23±0.790,P<0.05)、外周血浆IL-6水平[(42.02±3.006)pg/ml vs(107.90±10.551)pg/ml,P<0.001]、肠系膜淋巴结 Th17细胞比例[(4.39±0.978)%vs(9.60±1.125)%,P<0.001]、结肠组织IL-17 mRNA(13.32±3.768 vs 22.01±2.406,P<0.001)和IL-17蛋白表达免疫组化评分(1.90±0.738vs4.50±0.850,P<0.001)均明显降低,外周血IL-17、IL-4水平明显升高,脾脏Th17细胞比例无明显变化。野生型小鼠F.prausnitzii上清治疗组以上各项指标均与模型组有明显差异,但LFA-1-/-小鼠治疗组和模型组之间差异不明显。LFA-1-/-UC小鼠脾细胞及结肠粘膜组织TLR2的表达均明显低于野生型UC小鼠(P<0.001),F.prausnitzii上清治疗后野生小鼠两者均明显降低,但LFA-1-/-小鼠无明显变化。体外实验:LFA-1-/-naive CD4+T细胞培养3天后Th17细胞的分化比例明显高于野生型[(7.57±1.314)%vs(4.43±1.1 85)%,P<0.001],1/2倍F.prausnitzii上清明显抑制野生组 Th 17细胞的分化[(5.34±0.865)%vs(2.55±0.274)%,P<0.01]及上清IL-17和 IL-6水平(P<0.001),上调 IL-4水平。与野生组相比,LFA-1-/-组结肠粘膜组织 RORyt mRNA(0.77±0.070 vs 1.00±0.029,P<0.05)和 TLR2 mRNA(0.62±0.110 vs 1.11 ±0.230,P<0.05)表达均明显降低。1/2倍F.prausnitzii上清干预后野生组结肠粘膜组织RORyt mRNA(0.51±0.095 vs 1.00±0.029,P<0.001)和 TLR2 mRNA(0.40±0.128 vs 1.11±0.230,P<0.01)表达明显下调,但LFA-1-/-组两者表达均无明显差异。结论:F.prausnitzii上清通过抑制naive CD4+T细胞向Th17细胞分化,降低UC小鼠脾脏、淋巴结及肠道Th17细胞的比例,减少外周血及肠道Th17细胞相关炎症因子IL-17和IL-6的生成,减轻肠道炎症;其抑制Th17细胞分化的机制可能是通过下调CD4+T细胞表面TLR2表达所致;LFA-1基因的缺失使Th17细胞由脾脏向淋巴结和肠道的迁移障碍,从而减轻DSS诱导的结肠炎,并使 F.prausnitzii上清失去对结肠炎的保护作用。