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H5N1禽流感病毒在世界各地广泛传播不仅导致大批家禽死亡,造成严重经济损失,而且能引起人类感染,已成为公众健康的严重威胁并可能引发另一个大流感。在有效的H5N1疫苗应用之前,抗流感药物可能是控制H5N1病毒感染人类的有效方法之一,但目前对禽流感(H5N1)病毒的抗药性却了解很少。本研究组对2004-2005年间从越南、泰国和柬埔寨地区分离到的H5N1病毒进行耐药性监测表明,绝大部分分离株具有金刚烷胺类(adamantanes)耐药性突变,但在其它地区(中国,印度尼西亚)较少发现同类抗性变异株。奥斯米韦(oseltamivir)耐药株最初是在越南禽流感(H5N1)病毒感染患者体内发现,但最近的H5N1分离株并未发现已知的神经氨酸酶抑制剂耐药性突变。本实验室研究已经证实2004-2005年间从越南、泰国和柬埔寨分离到的H5N1病毒M2蛋白都存在金刚烷胺耐药性双突变(L26I,S31N),针对双突变株(26I,31N)为什么能在东南亚地区广泛流行,本研究从细胞水平探讨了双突变耐药株在不同温度下的生长特性。研究结果发现在较高温度(37oC,40oC)培养条件下,带有双突变的H5N1病毒株在MDCK细胞上复制能力比无此突变的敏感株更强,这一特性可能有助于此类H5N1双突变耐药株在体温高于37oC的禽类中广泛传播。此外,中国南方H5N1亚型流感分离株中最常见的烷胺类耐药性突变株(M2-S31N)的比例高于同时期分离到其它亚型(H6N1,H9N2)病毒,我们认为氨基酸突变(S31N)可能在禽流感(H5N1)病毒进化中自然产生,或许与病毒宿主适应性相关。目前仍不清楚从H5N1禽流感患者分离到的奥斯米韦(osletamivir)耐药突变(H274Y)究竟是在药物治疗过程中产生还是禽病毒本身带有。我们分离到一株A/chicken/HongKong/3123.1/2002 (H5N1)变异株(N1-H274Y),并从细胞水平证实了其对奥斯米韦药物具有耐药性。为了调查在禽源H5N1病毒中是否存在低水平的自然突变耐药株(H274Y)与敏感株混合感染情况,本研究以1997-2005年间从东南亚不同国家不同宿主分离到的311株H5N1分离株为样本,通过建立特异灵敏RT-PCR和荧光定量PCR/LNA进行定性定量分析,并且用不同类型细胞体系研究了奥斯米韦耐药株(N1-274Y)的生长特性。数据显示鸡源中耐药变异(H274Y)混合体存在的比例高于鸭鹅源分离株,但不存在区域性差异。此外,耐药株在哺乳动物细胞和禽类细胞传代结果表明变异株(H274Y)生长特性可能决定于不同宿主的选择性。