人类基因SEC15L3和SEC14L3的克隆与功能研究

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本论文分两部分,分别研究了人类exocyst复合体一个重要亚基基因SECl5L3和与胆固醇合成相关基因SEC14L3的初步生物学功能。 在真核生物细胞中保守的exocyt复合体是介导胞吐作用(exocytosis)的关键元件,而Sec15蛋白(Sec15p)是exocyst与其他蛋白及膜结构结合的中介。在哺乳动物细胞中Sec15p与众多的不同蛋白结合,使得exocyst可能在内吞作用,细胞周期及细胞骨架形成等过程中也起作用。我们从人胎脑cDNA文库中克隆到一条新的See15基因(SEC15L1,NM-019053)的剪接体cDNA——SEC15L3,并已提交GenBank,登录号为EF571007。逆转录PCR和荧光定量实验显示,该基因在胰腺,脾脏,胸腺,前列腺,和睾丸几个组织表达量较高,而且与其剪接体SECl5L,的组织表达谱有明显差异。生物信息学方法模拟SEC15L3蛋白,并与SEC15L1比较,显示两者有不同的高级结构,我们推测两者可能是不同exocyst的成分,并且在不同组织中行使不同功能。 SEC14L3的cDNA全长2082bp,编码一个长度为400个氨基酸残基的蛋白质。蛋白序列分析显示SEC14L3具有两个功能结构域:CRAL-TRIO和GOLD结构域。信息学分析显示SEC14L3与TAP/SPF(α-生育酚关联蛋白/上清蛋白因子)同源,可能为TAP/SPF蛋白家族的新成员。TAP/SPF在体内参与调节胆固醇合成与α生育酚代谢这两条重要的生理途径,提示SEC14L3可能具有类似的功能。绿荧光融合蛋白表达显示SEC14L3定位在细胞质内而GOLD结构域可能介导其准确定位。真核表达SEC14L3及其系列突变体蛋白显示SEC14L3能够促进肝癌细胞株7721的胆固醇合成,而且CRAL-TRIO和GOLD结构域及某些重要氨基酸残基对这种促进作用是必需的。α生育酚刺激实验显示SEC14L3的亚细胞定位及对胆固醇合成的促进作用均不受α生育酚刺激的影响。我们还提出了SEC14L3促进胆固醇合成的可能途径及后续可进行的工作。
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