黄芪汤成分对TGF-β诱导的肝纤维化细胞模型的影响

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目的:研究黄芪汤主要成分对TGF-β诱导的体外肝纤维化细胞模型的影响。  方法:采用TGF-β诱导人肝星状细胞系(LX-2),建立体外肝纤维化细胞模型,以黄芪汤主要成分黄芪甲苷、环黄芪醇、毛蕊异黄酮、毛蕊异黄酮苷、芒柄花素、芒柄花苷、甘草酸、甘草次酸、甘草素、异甘草素、甘草苷、异甘草苷进行干预,采用MTT试验检测细胞活性,CFSE法检测细胞增殖情况,Real-time PCR检测细胞内α-SMA、CollagenⅠ、TGF-β的mRNA表达,Western Blot法检测细胞内α-SMA及CollagenⅠ蛋白表达,酶联免疫法检测CollagenⅠ蛋白水平,以细胞增殖、α-SMA、CollagenⅠ、TGF-β表达为药效指标,观察各成分抗纤维化作用,并探索其量效关系。  结果:经模型考察,发现以TGF-β浓度10 ng/ml,诱导时间48小时,低血清培养可较好复制肝纤维化细胞模型。MTT实验表明,除毛蕊异黄酮和甘草素外,其余成分均可抑制活化肝星状细胞活性;流式细胞仪结果表明,甘草素、芒柄花苷、毛蕊异黄酮苷高浓度可抑制模型细胞增殖,环黄芪醇与芒柄花素不同浓度均可显著抑制模型细胞增殖;Real-time PCR实验发现,黄芪汤12种成分均可呈剂量依赖性地抑制模型细胞α-SMA、CollagenⅠ及TGF-β的mRNA表达;Westernblot实验研究进一步发现,黄芪汤12种成分可抑制模型细胞α-SMA及CollagenⅠ蛋白表达;ELISA实验结果证实,黄芪汤各成分对模型细胞胶原蛋白水平均有降低作用,呈明显量效关系及作用强度差异,其中,毛蕊异黄酮、芒柄花素、毛蕊异黄酮苷、异甘草素、异甘草苷、环黄芪醇、甘草酸降低胶原水平较为显著,EC50分别为0.73 nM、1.05 nM、2.17 nM、67.79 nM、30.93 M、62.10 nM、84.55nM;其次为黄芪甲苷、甘草次酸、甘草苷、甘草素,EC50分别为197.75 nM、456.47 nM、522.79 nM、657.36 nM;芒柄花苷EC50为2.06μM。  结论:黄芪汤多成分可抑制人肝星状细胞增殖与活化程度,具有抗纤维化作用。
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