研究目的:1、明确多电极射频消融治疗子宫肌瘤的安全性和有效性,为其应用于临床的可1行性提供依据.2、检测射频消融子宫肌瘤组织中凋亡基因bcl-2和bax蛋白的表达,探讨射频热治疗的机理.3、分析射频消融范围的影响因素,为射频消融临床治疗子宫肌瘤提供实验依据.第一部分子宫肌瘤射频消融的有效性及安全性研究.材料和方法:1、病例采集:搜集2002年9月至2003年4月在该院住院,临床诊断为子宫肌瘤,需开腹行肌瘤剔除或子宫切除的患者20例.该实验共消融肌瘤40个,术后均经病理确诊为子宫平滑肌瘤.2、方法:应用伞径1.5cm的多电极射频针,设定消融起始温度为75℃,终止温度为95℃,消融时间分别为10分钟、6分钟、5分钟.消融后对不同消融时间组肌瘤取材,做电镜、光镜检查.消融前、消融过程中和消融后连续测量病人体温(腋下温度和口腔温度),消融过程中测量宫旁血管区组织温度.结果:1.大体标本观察.消融10分钟和6分钟组,肌瘤纵剖面电极分布区为一近似圆形毁损灶,与周围正常肌瘤组织分界清晰,呈淡黄色,失去光泽;组织变硬,质地变脆;而5分钟组仅中心0.5×0.5 cm<2>的组织变硬,失去光亮,未变色,毁损灶边界不清.1.2.光镜观察.消融10分钟,消融中心及中心外1/2R处平滑肌瘤组织结构破坏,见大片无结构的坏死区;镜下无法辨别组织来源.边缘处见平滑肌瘤细胞呈广泛的玻璃样变性,有少许散在的坏死细胞,未见片状坏死区,间质血管充血明显.边缘外0.5cm处组织结构清楚,细胞无明显坏死变性,血管仍有充血,但不显著.6分钟组镜下表现同10分钟组.消融5分钟组见平滑肌瘤组织结构清楚,破坏不明显,较多的平滑肌瘤细胞玻璃样变性,未见无结构坏死区.1.3.电镜观察.消融中心组织结构破坏,有大片的无结构视野;残存平滑肌瘤细胞核膜断裂,染色质崩解成碎片状,细胞膜边界不清,细胞器超微结构崩解,成絮状结构.毁损灶中心外1/2半径处亦见大片的无结构视野,残存瘤细胞核染色质边集,胞浆溶解,肌丝溶解,细胞膜不完整.可看到部分胞核固缩,染色质增多、边集,呈典型的凋亡改变.毁损灶边缘细胞形态完整,细胞核经度边集,线粒体肿胀.1.4.宫旁组织温度在消融过程中宫旁组织温度为37.0-38.2℃平均温度为37.2±0.8℃.1.5.消融前后病人体温无明显变化(P>0.05).第二部分细胞凋亡在子宫肌瘤组织射频损伤中的作用研究.材料和方法:1.一般资料采用第一部分实验中10分钟消融组的石蜡包埋组织块,按消融灶取材部位的不同分为两组:坏死灶边缘组(A组)和边缘外0.5cm处组(B组).每组均含20例标本.取20例未消融肌瘤组织作为对照组(C组).2.方法:(1)凋亡指数测定消融灶边缘和边缘外0.5cm处每张切片HE染色,随机计数10个高倍视野中平均凋亡细胞数目为细胞凋亡指数.(2)免疫组化二步法,测定消融和未消融肌瘤组织bcl-2和bax蛋白的表达.结果:1.光镜和电镜下凋亡细胞的观察光镜观察坏死灶边缘处见平滑肌瘤细胞呈广泛的玻璃样变性,部分散在的细胞,胞核蓝染,胞浆淡红,核染色质致密浓缩,部分有核碎裂,呈凋亡细胞的表现;边缘外0.5cm处组织结构清楚,亦见散在的凋亡细胞.对照组未消融子宫肌瘤组织结构清晰,细胞呈卵圆形或梭形,旋涡状排列,凋亡细胞少见.电镜观察毁损灶边缘肌瘤细胞核染色质边集,胞浆溶解,细胞膜不完整;部分细胞胞核固缩,染色质增多、边集,呈典型的凋亡改变.部分细胞形态及细胞器保持完整,线粒体肿胀;体积缩小,核浓集并靠近核膜,与邻近细胞、组织失去接触,呈早期凋亡改变.对照组未消融子宫肌瘤组织细胞完整,内质网及线粒体结构清晰,核膜光滑,染色质分布均匀.未见凋亡细胞.2.子宫肌瘤消融灶边缘及边缘外0.5cm处的细胞凋亡指数(16.3±3.4)与未消融肌瘤组织细胞凋亡指数(7.1±1.6)比较有差异性(P<0.01),前者高于后者.3.bcl-2及bax蛋白的表达.①bcl-2蛋白的表达.bcl-2蛋白在A组有17例表达为阳性,B组有18例表达为阳性;A组和B组均主要呈弱阳性染色.而未消融子宫肌瘤组织标本中bcl-2蛋白全部表达为阳性,且呈中等至强阳性染色,明显强于消融肌瘤bcl-2蛋白的表达(P<0.05).②bax蛋白的表达.bax蛋白在A组有19例表达为阳性,B组bax蛋白全部表达为阳性;A组和B组均主要呈中等至强阳性染色.而未消融子宫肌瘤组织标本中,有15例bax蛋白表达为阳性,且为弱阳性表达,弱于消融肌瘤bax蛋白的表达(P<0.05).第三部分影响消融范围的相关因素分析.材料和方法:1一般资料.搜集2003年4月至2003年10月在该院住院,临床诊断为子宫肌瘤,需开腹行肌瘤剔除或子宫切除的患者20例.该实验共消融40个,术后均经病理确诊为子宫平滑肌瘤.2.实验方法和步骤.(1)用不同消融时间:不阻断子宫任何血运下,应用伞径1.5cm的射频针,设定消融起始温度75℃,终止温度95℃,对子宫肌瘤进行消融.(2)应用伞径不同的射频针:不阻断子宫任何血运下,设定消融起始温度75℃,终止温度95℃,消融时间为10分钟,应用伞径分别2.5cm和2.0cm的多电极射频针对子宫肌瘤消融.(3)肌瘤在不同血运下的消融范围:5例患者,10个肌瘤.阻断子宫一侧血运组:处理一侧子宫血管后,应用伞径1.5cm的射频针,设定消融起始温度75℃,终止温度95℃,消融时间为10分钟,对肌瘤消融,共消融5个肌瘤.阻断子宫双4侧血运组:处理子宫血管后以相同条件对肌瘤消融,共消融5个肌瘤.结论:1、多电极射频消融作用于子宫肌瘤,引起组织凝固性坏死,消融过程安全.其远期效果及安全性有待进一步临床观察.2、高温诱导的细胞凋亡在射频消融致子宫肌瘤损伤中起着重要作用,可能是消融引起肌瘤坏死的原理之一.3、射频消融治疗子宫肌瘤,其消融范围与消融时间、多电极射频针伞径以及肌瘤本身血运有密切关系,临床应用时应综合考虑,消融时间以10分钟为宜,不同大小的肌瘤需选择伞径不同的多电极针,以达根治子宫肌瘤的目的.