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研究背景和目的:人类疱疹病毒8型(humanherpesvirus8，HHV-8)，又称卡波氏肉瘤相关疱疹病毒(Kaposissarcoma-associatedherpesvirus，KSHV)，是Chang等于1994年在一例艾滋病患者的卡波氏肉瘤(Kaposissarcoma，KS)组织中用代表性差异分析方法(representativedifferenceassay)发现并鉴定的一种新型疱疹病毒。随后的研究发现HHV-8存在于所有类型的KS组织中(包括经典型、艾滋病相关型、地方型和医源型KS)，并认为是KS发生的条件之一。HHV-8还与原发性渗出性淋巴瘤(primaryeffusionlymphoma，PEL)，多中心性卡斯特莱曼病(multicentricCastlemansdisease，MCD)的发病密切相关。
HHV-8的感染率在不同的地区及用不同的血清学方法所检测的结果不尽相同。由于缺乏血清学诊断的“金”标准，所得的结果不一定都能反映真实情况，但基本上都反映了相似的趋势，即与KS的发病率存在平行关系。目前我国尚无大规模普通人群，特别是无偿献血人群的HHV-8感染率的报道。本研究首次对广州地区3135名无偿献血者进行了血清流行病学调查，并用巢式PCR法对广州地区500名无偿献血者进行了外周血单核细胞中HHV-8DNA的检测。
HHV-8基因组为线性双链DNA，有一长约140.5kb的独特编码区(uniquecodingregion)，编码至少85个开放读码框架(openreadingframes，ORFs)，包括15个为HHV-8特有的ORFs，K13即为其中之一。
尽管做了大量的研究，目前仍未建立标准的HHV-8血清学诊断方法，主要的原因之一是对哪些病毒蛋白可作为抗原用于检测还未完全了解。HHV-8在普通健康人群中存在一定的感染率，而且病毒通常以潜伏感染状态长期存在于人体。对病毒潜伏感染的检测在调查普通人群感染率时显得尤为重要，且同时使用潜伏期和裂解期蛋白检测血清中的抗体可以提高检测的敏感性。K13基因编码的vFLIP(viralFas-associateddeathdomainIL-β-convertingenzyme(FLICE)inhibitoryprotein)蛋白是病毒主要潜伏期蛋白之一，体外克隆和表达潜伏基因是建立HHV-8潜伏感染检测方法的基础。本研究构建了pGEX-4T-1/K13重组质粒大肠杆菌表达体系，实现目的蛋白的体外表达，并对目的蛋白的抗原性进行分析。
材料和方法:1.3135份血浆及500份全血来自2004年10月至2005年3月在广州市参加无偿献血的人群，均经过金标HBsAg快速试纸条初筛合格。
2.HHV-8IgGELISAKit(ABI，USA)检测3135份血浆抗HHV-8IgG抗体。
3.500份全血基因组DNA抽提用TaKaRaMiniBESTBlood&CulturedCellGenomicDNAExtractionKitVer.2.0试剂盒抽提基因组DNA。
4.巢式PCR扩增以KS4/KS5为外对引物，KSl/KS2为内对引物做巢式PCR，阳性PCR产物直接测序。
5.K13蛋白的原核表达及抗原性分析将质粒pGEX-4T-l和HHV-8K13基因分别用BamHⅠ、EcoRⅠ双酶切，纯化连接后转化DH5α感受态细菌，构建重组质粒pGEX-4T-l/K13。重组质粒pGEX-4T-1/K13经酶切和测序鉴定后转化BL21感受态细胞，以异丙基-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达融和蛋白，对表达的融合蛋白进行SDS-PAGE和Western-Blot分析。
结果:1.3135名献血者中有6名在血浆标本中检测出HHV-8IgG抗体阳性，均为汉族、男性献血员，总阳性率为0.19％。
2.500名献血者中有2名在外周血单核细胞中检测出HHV-8DNA，均为汉族、男性献血员，总阳性率为0.4％。
3.构建了重组质粒pGEX-4T-1/K13，实现了目的蛋白的体外表达。SDS-PAGE分析显示目的蛋白条带分子量约为47kDa，与理论值相符。Western-Blot分析表明目的蛋白不能被HHV-8IgG抗体阳性的血浆识别。
结论:1.广州地区无偿献血者HHV-8的感染率较低，而且目前对HHV-8的致病性、传播方式等方面了解还不全面，标准的诊断方法尚未建立，故目前无需对广州地区献血者进行HHV-8的检测。
2.构建了重组质粒pGEX-4T-1/K13，成功地在体外表达了重组融合蛋白，Western-Blot证实重组融合蛋白不能被HHV-8IgG抗体阳性的血浆识别，提示K13蛋白不具有潜在地诊断抗原的价值。