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本文对比了水溶液悬浮聚合法和沉淀聚合法合成的氨鲁米特(AG)分子印迹聚合物微球后,选择水溶液悬浮聚合法制备AG和苯佐卡因的分子印迹聚合物微球(MIPMs),并把合成的MIPMs作为高效液相色谱柱的填料和固相萃取的吸附剂,应用于人体尿液、血清和鱼肉组织样品中目标分子的分离富集和检测。论文的主要研究内容如下:
(1)以甲基丙烯酸(MAA)为功能单体,偶氮二异丁腈(AIBN)为引发剂,乙腈和氯仿不同比例的混合溶液为溶剂,采用沉淀聚合法优化了合成非印迹聚合物的条件,通过扫描电镜(SEM)对微球进行形貌表征,确定合成非印迹聚合物的最优条件:交联剂为二乙烯基苯(DVB),功能单体与交联剂的摩尔比为1∶5,溶剂为氯仿:乙腈=5.5∶11(V/V, mL),引发剂用量为30 mg,合成的聚合物微球粒径在3-6μm之间。氨鲁米特印迹聚合物的合成除加入了模板分子之外,其他步骤与非模板的一样,将此聚合物微球填装色谱柱,评价MIPMs的特异性识别能力。
(2)以甲基丙烯酸(MAA)为功能单体,二甲基丙烯酸乙二醇酯(EGDMA)为交联剂,偶氮二异丁腈(AIBN)为引发剂,采用水溶液悬浮聚合法优化了合成非印迹聚合物的条件,通过扫描电镜(SEM)对微球进行形貌表征,确定合成非印迹聚合物的最优条件:溶剂为15 mL氯仿,分散剂为PVA-1788,用量为6.0g,水油比为13∶1,搅拌速度为500 rpm,合成的聚合物微球粒径在8-20μm之间。氨鲁米特印迹聚合物的合成除加入了模板分子之外,其他步骤与非模板的一样,将此聚合物微球填装色谱柱,评价MIPMs的特异性识别能力。
(3)通过液相色谱柱的评价,用沉淀聚合法和水溶液悬浮聚合法合成的聚合物微球的印迹因子分别是2.43和3.11,于是选择后者聚合物微球作为固相萃取的吸附剂,优化了装载液溶剂、清洗液和洗脱液的组成等条件,并且用于人体尿液中氨鲁米特的富集分离与检测。实验结果表明经过MIPMs柱处理后的尿液样品,干扰杂质基本消除,平均回收率为93.44%,相对标准偏差(R.S.D.,n=3)为1.21%,并且由LOD=3S/N可以计算出,AG的方法检出限为0.005μg/mL。此外,这种方法制备过程简单,避免了繁琐的后处理工作,选择性好,灵敏度高,满足了人体尿液和其他生物样品中AG的检测,具有很好的实际应用价值。
(4)采用前面优化好的水溶液悬浮聚合法制备印迹聚合物微球的条件,以苯佐卡因为模板分子合成了印迹聚合物微球,通过扫描电镜(SEM)和液相色谱表征,计算其印迹因子为1.31。在优化了上载液溶剂、清洗液和洗脱液的组成等条件后,用于萃取鱼肉组织和人体血清样品中的苯佐卡因。实验表明:苯佐卡因的平均回收率分别是91.19%和90.56%,相对标准偏差(R.S.D.,n=3)分别为3.03%和2.65%,而且经过MIPMs柱处理后的实际样品的干扰杂质基本消除,其线性范围为0.02-10μg/mL,R=0.9999,最低检测限都达到0.005μg/mL。同时,该检测方法操作简单,有很好的精密性、重现性和稳定性,选择性高,适合于检测多基质干扰的生物复杂样品。