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铜绿假单胞菌在自然界中分布广泛,可通过水源、土壤、工器具、接触等多种途径传播,并对消毒剂、干燥剂、紫外线等理化因素及不良环境有极强的抵抗力,是重要的食源性致病菌。研究发现该菌常以生物被膜的形式存在,生物被膜的形成提高了其引发食源性疾病的发生率,并使得治疗非常困难,对人类健康造成了很大的威胁。
本论文通过分析48株铜绿假单胞菌生物被膜与基因型之间的关系,希望能从基因水平上找到抑制或清除PA生物被膜的突破口;此外,由于生物被膜状态细菌基因转移更加活跃,生物被膜的形成可能更利于整合子系统的传播,因此,对成膜能力强的菌株进行整合子的检测与监控非常必要。主要研究内容及结论如下:
(1)采用改良组织平板培养-结晶紫染色方法对48株铜绿假单胞菌生物被膜形成能力进行定量分析,结果48株。PA中,41株具有生物被膜形成能力,其中弱粘附性和生物被膜形成能力者为15株,中等粘附性和生物被膜形成能力者为19株,强粘附性和生物被膜形成能力者为7株;7株菌不具有粘附性和生物被膜形成能力。
(2)采用ERIC-PCR方法对48株铜绿假单胞菌进行基因分型,结果在17%基因相似水平上PA菌株可被分为A、B、C、D、E五型,分别包含菌株个数为7、7、10、16和8株;前三个基因型A、B和C包含的菌株生物被膜形成能力相对较弱,D和E基因型的PA具有较强的生物被膜形成能力,菌株生物被膜形成能力和基因型之间具有一定的相关性。
(3)采用多重PCR和PCR-RFLP的方法检测7株生物被膜形成能力强的铜绿假单胞菌整合酶一耐药基因盒的携带情况,结果显示6株铜绿假单胞菌携带一类整合酶基因,阳性率为85.7%,未发现二类和三类整合酶;其中5株携带耐药基因盒:1株耐药基因盒PCR扩增片段长度为1913bp,2株为2360bp,2株同时扩增出1664bp和1913bp两个片段。
本论文发现PA生物被膜形成能力与基因型相关,为控制PA生物被膜形成提供了新的思路,同时,生物被膜的形成能够加快整合子及相关耐药基因的传播,本研究发现生物被膜形成能力强的PA整合酶基因携带率高,且耐药基因盒种类非常多样,生物被膜和整合子的协同作用很可能使细菌耐药情况进一步恶化,因此,提示我们今后应加强该类细菌的监控。