牛传染性鼻气管炎（IBR）和赤羽病（AKA）是两种重要的危害养牛业的病毒性传染疾病，曾给养牛业带来巨大的经济损失，我国进出口境牛及其相关产品大多要求对这两种疫病进行检疫。目前检测IBR和AKA的方法主要有免疫荧光抗体试验、中和试验、酶联免疫吸附试验、电镜技术和胶体金等技术，这些方法对检测IBRV和AKAV起到了重要作用，但同时也存在特异性不强、灵敏性差、耗时长等缺点。迫切需要建立早期的快速、准确的牛病诊断方法，以预防和清除该类传染病隐性感染，确实保护我国畜牧业的健康快速发展。本研究成功建立了检测牛传染性鼻气管炎（IBR）和赤羽病（AKA）的快速检测体系，包括多重PCR、基因芯片和荧光定量PCR法，并优化了一系列反应条件，建立了相应的检测试剂盒，大大加快了牛传染性鼻气管炎（IBR）和赤羽病（AKA）的检测速度并提高了灵敏度。现将所做工作介绍总结如下：（1）双重PCR检测体系。根据牛疱疹病毒1型（BHV1）gB基因序列和赤羽病病毒（AKAV）的S基因序列,设计了2对针对这2种病毒的特异引物，成功构建了包含扩增片段的阳性标准质粒。建立和优化了2种病毒的多重PCR检测体系，经优化后确定退火温度Tm值为59℃，Mg²⁺浓度为1.5nmol/μL。双重PCR阳性标准质粒检测灵敏度IBRV的灵敏度为0.13pg/25μL，AKAV的灵敏度为1.04pg/25μL。（2）基因芯片检测方法。在双重PCR的基础上，在所扩增片段中设计特异性、保守性的寡核苷酸探针，扩增产物时，用荧光素Cy3标记正向引物的5′端。实验确定了适宜杂交温度为38℃。基因芯片检测阳性标准质粒IBRV的灵敏度为0.013pg/25μL，AKAV的灵敏度为0.104pg/25μL。（3）荧光定量PCR法。在所构建的两种病毒的阳性标准质粒基础上，分别设计2对特异性引物，通过对荧光定量PCR反应条件的优化,建立了SYBR Green I荧光定量PCR分别检测IBRV和AKAV的方法。检测IBRV阳性标准质粒的灵敏度为1.3fg（相当于360copies）/25μL,AKAV阳性标准质粒的灵敏度为1.04fg（相当于926copies）/25μL。上述三种检测方法中，多重PCR方法灵敏度最低，基因芯片方法次之，荧光定量方法最高。多重PCR操作相对简单，而且仪器便宜，基因芯片方法操作最复杂，仪器昂贵，其高通量优势比较明显。荧光定量PCR方法虽然相对较好，但不能同时检测两种病毒。所以三种方法各有优缺点，需根据不同情况选择使用。