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猪脑心肌炎是由脑心肌炎病毒(Encephalomyocarditis virus，EMCV)引起的一种重要的人畜共患性传染病，该病以脑炎、心肌炎、心肌周围炎以及母猪繁殖障碍为主要特征。目前对EMCV的分子致病机制及相关蛋白功能的了解不够深入，缺乏理论依据。本研究旨在探究EMCV对于小鼠神经母细胞瘤细胞(N2a)转录组的影响，探索基因表达与致病性之间的关联，揭示EMCV感染后的分子机制。此外，构建了稳定表达EMCV先导(Leader,L)蛋白的细胞模型，为进一步阐明EMCV的致病机制及深入研究L蛋白的功能提供科学依据。 用自河北省分离的EMCV BD2（GenBank序列号:KF709977）毒株感染N2a细胞，收集感染后7h的细胞样本，分别提取EMCV感染组和正常细胞对照组两组样本的总RNA，使用NimbleGen杂交体系将标记好的ds-cDNA与小鼠基因表达谱芯片杂交，然后洗涤，使用Axon GenePix4000B microarray scanner对芯片进行扫描，获得差异表达基因数据。应用生物信息学方法对筛查出的差异表达基因数据进行聚类分析、GO分析以及KEGG通路分析，筛选差异表达的免疫相关基因及信号通路。利用Real-time FQ-PCR方法，对微阵列数据结果进行验证。结果表明，EMCV感染N2a细胞7h共有21143个基因被鉴定为差异表达基因。这些基因参与多种重要反应，主要包括免疫反应，炎症反应，凋亡，防御反应，信号转导等，且与干扰素相关的差异表达基因均有明显上调，提示干扰素在宿主抗病毒感染过程发挥重要作用。通路分析表明，筛选差异表达的主要信号通路包括PI3KAkt信号通路，MAPK信号通路，细胞因子间相互作用，趋化因子信号通路，TCR，RLR信号通路和细胞凋亡通路等，表明EMCV感染7h后，宿主启动不同策略来激活免疫、炎症反应等以对抗感染。对10个差异表达基因进行Real-time FQ-PCR，结果表明，微阵列分析结果能够良好的反应基因表达的总体变化。 应用脂质体介导DNA转染法，将表达EMCV L蛋白的重组质粒pNTAP-B-L转染至单层N2a细胞中，通过筛选具有G418抗性的单细胞克隆，以有限稀释法筛选单细胞克隆，扩增培养，建立稳定表达TAP tag-L融合蛋白的N2a细胞系;利用RT-PCR、Western blotting和间接免疫荧光试验(IFA)对融合蛋白TAP tag-L的表达及细胞内定位情况进行鉴定，将表达为阳性的细胞克隆命名为N2a-TAP-L细胞系。结果表明，EMCV的L基因成功整合至N2a细胞基因组DNA中，且L蛋白在获得的阳性N2a细胞中能够稳定表达，表达产物TAP tag-L主要分布在细胞浆内，建立稳定表达EMCVL蛋白的N2a细胞系。 综上所述，EMCV感染宿主细胞N2a7h后，与免疫炎症反应相关的差异表达基因上调显著，提示宿主启动不同策略来激活免疫炎症反应以对抗感染;成功构建了稳定表达EMCV L蛋白的N2a细胞系。