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目的:探讨小发夹RNA（shRNA）沉默缺氧诱导因子（HIF-1α）表达对缺氧条件下人角膜上皮细胞血管内皮生长因子和色素上皮衍生因子表达的影响;期望通过构建HIF-1αshRNAs质粒转染自发永生化人角膜上皮细胞（S-ihCECs），筛选高干扰效果的质粒载体，探索治疗缺氧性角膜新生血管的新方法。方法：1、对S-ihCECs进行复苏培养，在倒置相差显微镜下观察细胞生物学特性，免疫荧光染色检测CK12的表达对其进行鉴定；CCK-8检测S-ihCECs在不同缺氧条件下的增殖抑制率；qRT-PCR检测不同浓度CoCl2缺氧诱导下S-ihCECs中HIF-1α基因的表达；免疫荧光检测不同缺氧诱导时间HIF-1α蛋白的表达。2、针对HIF-1α mRNA序列靶点设计及构建3个小发夹RNA（shRNA),分别在体外转染S-ihCECs,36h后S-ihCECs在1mM CoCl2中缺氧诱导6h，qRT-PCR检测HIF-1α、VEGF、PEDF mRNA表达，Western Blot检测HIF-1α、VEGF蛋白表达，Elisa检测PEDF蛋白表达。结果：1、S-ihCECs接种约2h即大部分贴壁，初呈三角形或梭形，随后细胞逐渐展开呈不规则多边形，待接近80%融合时，细胞相互紧密连接呈铺路石样外观，CK12表达阳性；不同浓度CoCl2作用6h时随着CoCl2的浓度增大，S-ihCECs增殖抑制率增大，不同浓度CoCl2作用24h时低浓度对S-ihCECs有促进增殖作用，高浓度抑制细胞增殖；1mM CoCl2培养S-ihCECs6h HIF-1α mRNA的表达与常氧组比较有统计学意义；缺氧1h的S-ihCECs胞浆和胞核内均有弱荧光出现，3h胞核荧光染色渐增强，6h胞浆和胞核染色最强，24h胞核荧光亮度较前减弱，胞浆几乎未见荧光。2、S-ihCECs经干扰后,和缺氧组比较，HIF-1α mRNA表达下调（70.9±2.8）%，HIF-1α蛋白表达下调；VEGF mRNA表达下调（51.9±15.7）%, VEGF蛋白表达下调；PEDF mRNA表达上调1.22±0.18倍，PEDF蛋白表达上调。结论：1、CoCl2的作用时间和浓度对S-ihCECs增殖均有影响，在化学模拟缺氧时应考虑时间、浓度因素。2、不同浓度CoCl2模拟化学缺氧诱导HIF-1α mRNA的表达不同3、HIF-1α RNAi可通过沉默HIF-1α基因从而下调人角膜上皮细胞VEGF的表达，表明人角膜上皮细胞VEGF的表达受HIF-1α的调控。4、HIF-1α RNAi可通过沉默HIF-1α基因从而上调人角膜上皮细胞PEDF的表达，推测人角膜上皮细胞PEDF的调控也是通过HIF通道。5、HIF-1是缺氧诱导的角膜新生血管产生的关键因子之一。6、筛选出高干扰效果的HIF-1α shRNA质粒载体，为治疗缺氧性角膜新生血管提供了可能的治疗方向。