猪精液4℃低温保存技术的研究

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由于猪精子结构对温度变化特别敏感,猪精液更适合液态保存。4℃的猪精液保存,温度介于常温和冷冻保存间,相较于常温保存更久,较冷冻保存则更经济、便利。本研究拟对猪精液的低温保存技术进行系统、深入的研究,以期为猪人工授精提供技术支撑。研究内容包括:(一)低温保存基础稀释液和处理方法的优化、筛选:以“手握法”采集健康成年种公猪精液,用6种稀释液稀释后4℃低温保存,以精子总存活时间、有效存活时间及存活指数为检测指标,筛选最优基础稀释液配方,探讨保存前不同精液处理方法在猪精液4℃低温保存的效果;以最优稀释液和精液处理方法稀释猪精液,4℃低温保存2~3后用于低剂量常规部位人工授精试验,依据受胎率来评价效果。结果表明:(1)6号稀释液(葡萄糖-蔗糖-卵黄-庆大霉素-青霉素),稀释保存精子的总存活时间长达235.20h,有效存活时间长达129.60h,存活指数92.57h,显著优于其它5种(P<0.05);(2)精液带精浆直接稀释的效果优于精液离心处理(P<0.05);(3)精液以1:2或1:3比例稀释更利于猪精液4℃低温保存(P<0.05);(4)低剂量常规部位人工授精母猪受胎率达83.33%,受胎母猪分娩率100%,平均产仔数10.9头,平均产活仔数9.9头。(二)4种抗氧化物对猪精液4℃低温保存效果的影响:通过在猪精液低温保存基础稀释液中添加不同浓度的水蛭素(0、0.50、1.00、1.50、2.00mg·mL-1)、黄芪多糖(0、0.10、0.20、0.30、0.40mg·mL-1)、茶多酚(0、0.50、1.00、1.50、2.00mg·mL-1和L-精氨酸(0、0.50、1.00、1.50、2.00mg·mL-1),采用碘化丙啶荧光染色检测精子活率,计算机辅助精液分析仪检测精子活力,Diff-Quik染色检测精子畸形率,考马斯亮蓝染色检测精子顶体完整率,低渗肿胀法检测质膜完整率,以研究4种抗氧化物对4℃低温保存的猪精液品质的影响。结果表明:在猪精液低温保存基础稀释液中添加适宜浓度的水蛭素、黄芪多糖、茶多酚和L-精氨酸,有利于维持精子在4℃低温条件的活率和活力,降低精子畸形率,提高精子顶体和质膜完整率,其最佳浓度分别为2mg·mL-1、0.3mg·mL-1、1mg·mL-1、1mg·mL-1。综上所述,本课题研究通过试验筛选获得猪精液低温保存的最优基础稀释液配方和精液低温保存前处理方法;验证了用低温保存的猪精液进行低剂量常规部位人工授精的可行性;证实了4种抗氧化物在适宜浓度下对猪精液4℃低温保存起显著的保护作用。研究成果为猪精液低温保存技术的研究及推广提供了良好的参考依据。
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