兔骨髓间充质干细胞对喉返神经损伤后修复的研究

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目的:  1.利用全骨髓贴壁的实验方法,体外分离、培养并鉴定兔骨髓间充质干细胞,探讨依据此方法制作一种简便高效的细胞培养方案的可行性。  2.成功建立兔左侧喉返神经损伤的动物模型,并将适量的骨髓间充质干细胞移植到喉返神经组织受损区域,一段时间后,对比观察其对喉返神经损伤后的修复有无促进作用。  方法:  1.采用全骨髓贴壁培养法分离兔骨髓间充质干细胞,传代培养,通过计数法绘制P。代细胞的贴壁率曲线及生长曲线,并通过证实获取细胞具有干细胞的多向分化潜能,反向鉴定细胞为骨髓间充质干细胞。  2.暴露左侧喉返神经并在手术显微镜下垂直喉返神经纵轴方向切断1/2直径宽度后,即刻向损伤区域注入预先备好的骨髓间充质干细胞,分别于损伤前、损伤即刻及损伤4周后测量喉返神经复合动作电位,分析比较统计学意义。4周后制作并观察喉返神经病理切片。  结果:  1.原代细胞接种24h贴壁,6天后大量增殖;P。代细胞2h贴壁30%以上,12h贴壁90%。细胞生长曲线呈S型,细胞分别在第2、3、8天,进入潜伏期、对数期和平台期。细胞向成骨及脂肪细胞方向诱导后,试剂染色呈阳性反应。  2.喉返神经损伤4周后,将移植组动作电位与假移植组的动作电位进行配对t检验,结果为P=0.047<0.05,显示两组间存在统计学差异,病理切片对比可见,假移植组的神经组织变性较移植组严重。  结论:  1.全骨髓贴壁法可操作性强,实验结果重复性强,所获得的骨髓间充质干细胞纯度高,活性强,增殖快且数量较充足,是一种简便高效的培养方法。  2.采用神经组织横向半切法可以简便有效的建立兔喉返神经损伤的动物模型,移植后的骨髓间充质干细胞对喉返神经损伤组织的修复具有一定的促进作用。
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