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丙酮酸氧化酶(Pyruvate oxidase，EC 1．2．3．3)是一种非常重要的临床诊断用酶，其最重要的应用是用于测定丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶活力浓度。
本研究首次利用PCR技术，从Aerococcus viridans ATCC10400基因组中扩增出丙酮酸氧化酶基因(AvPyOD)，并将其克隆入pSML104载体质粒中，得到了N端带有组氨酸标签的融合表达质粒pSMLPyOD，然后将其转化入E. coli DH5a细胞，通过高通量的显色指示平板法筛选到阳性的重组大肠杆菌E.coli DH5a/pSMIyPyOD。利用trc启动子的渗漏表达特性，重组质粒pSMLPyOD在trc启动子的控制下，不需添加IPTG诱导就能进行表达。对培养基进行优化，得到了适合表达的培养基配方，该配方以乙酸盐为碳源，能升高细胞内cAMP浓度，从而促进重组酶的表达。为了克服渗漏表达的丙酮酸氧化酶对宿主的毒性，以达到提高菌体浓度和表达量的目的，又设计了抑制表达的培养基配方，该配方以葡萄糖或丙酮酸钠等易利用的物质为碳源，能促进菌体生长而抑制表达。发酵前期使用含葡萄糖的培养基，使菌体生长，当葡萄糖耗尽后流加能够促进产酶的培养基。采用这种方法，在5L发酵罐中进行发酵培养，在不需添加IPTG诱导的情况下，重组丙酮酸氧化酶的产量可以达到450mg/L，总的酶活力可达到1748.3U/L。
对表达的重组丙酮酸氧化酶进行分析，其中96.8％的重组酶是可溶性的。采用Ni-IDA亲和层析一步纯化，纯化的酶比活力为1.21U/mg，回收率为23.1％，纯化倍数为7.1；而采用硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose离子交换、UltrogelAcA34凝胶过滤三步纯化的酶比活力为1.1U/mg，回收率为29.8％，纯化倍数为10。
对纯化的重组酶进行酶学性质研究，结果显示，酶的最适pH7.0，最适温度30℃，oH6.5时酶的pH稳定性最高，在37℃以下，酶的温度稳定性最高。