第一部分3，3’-二吲哚甲烷抑制STAT3通路影响卵巢癌细胞粘附、侵袭、迁移的实验研究　　目的：观察3，3’-二吲哚甲烷（3，3’-diindolymethane，DIM）对人卵巢癌A2780、SKOV3细胞侵袭和迁移能力的影响，并探究信号转导和转录激活因子3（signaltransducer and activator of transcription3，STAT3）信号通路在DIM抑制卵巢癌细胞侵袭和迁移中的作用。　　方法：选取人卵巢癌SKOV3、A2780细胞为研究对象，经不同浓度的DIM处理后，分别采用细胞黏附实验、划痕实验和Transwell小室侵袭实验检测DIM对卵巢癌细胞黏附、迁移和侵袭能力的影响；应用蛋白质印迹法（Western blot）检测DIM作用后对STAT3及磷酸化STAT3（phospho-STAT3，p-STAT3）、VEGF和MMP-2、MMP-9蛋白表达水平的影响。　　结果：DIM处理后，细胞的黏附能力受到明显抑制，并呈浓度依赖性；划痕实验表明，DIM处理后细胞的迁移能力明显下降，其划痕愈合率明显降低（P＜0.05）；Transwell小室检测显示，在A2780细胞中，DIM（50和100μmol/L）处理组的（326±20.15）和（59.33±13.32）个/视野，与对照组中穿过基质膜的细胞数（537.33±53.15）个/视野相比，发生侵袭的癌细胞数明显减少（P＜0.01）；在 SKOV3 细胞中，DIM（50和100μmol/L）处理组的（437±23.15）和（49.33±10.92）个/视野，与对照组中穿过基质膜的细胞数（926.33±43.15）个/视野相比，发生侵袭的细胞数显著减少（P＜0.01）。蛋白质印迹法检测结果显示，STAT3总蛋白的表达水平无明显差异，但其磷酸化（p-STAT3）蛋白的表达水平下调，并伴有 VEGF、MMP-2和 MMP-9表达的同步下调，差异有统计学意义（P＜0.05）。　　结论：DIM能显著抑制卵巢癌SKOV3、A2780细胞的粘附、侵袭、迁移能力，其可能通过抑制 STAT3的磷酸化，降低 VEGF和MMP-2、MMP-9蛋白的表达水平而起作用，提示DIM有可能成为一种有潜在效用的抗卵巢癌的药物。　　第二部分3，3’-二吲哚甲烷与shRNA-STAT3抑制卵巢癌细胞粘附、侵袭、迁移的实验研究　　目的：探讨阻断STAT3信号通路与 DIM卵巢癌细胞后对其粘附、侵袭、迁移的影响，并探究其机理，为靶向肿瘤基因治疗提供实验依据。　　方法1．本实验构建 pGC-STAT3-shRNA(short hairpin RNA)质粒，选取人卵巢癌细胞系SKOV3为研究对象，使用罗氏FuGENEHD transfection reagent将其转染至SKOV3卵巢癌细胞中，通过RNA干扰（RNAinterference，RNAi）沉默STAT3的表达。同时，采用荧光定量PCR、蛋白免疫印迹法及细胞免疫荧光法分别从RNA水平和蛋白水平检测shRNA表达质粒对STAT3沉默的效率；　　2.通过shRNA沉默STAT3，随后加入25、50、75μmol/L DIM作用于SKOV3细胞，根据实验分为对照组、DIM组、阴性质粒组、阴性质粒+DIM组、STAT3-shRNA组、STAT3-shRNA+DIM组，分别采用MTT实验、细胞粘附实验、Transwell小室迁移和侵袭实验测定SKOV3卵巢癌细胞的粘附、侵袭及迁移能力；采用Western Blot方法检测STAT3及磷酸化STAT3（phospho-STAT3，p-STAT3）及其下游蛋VEGF、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平的变化。　　结果：首先检测了STAT3-shRNA质粒对STAT3基因具有明显的沉默效应。在这项研究中，我们发现肿瘤细胞的粘附、侵袭及迁移能力被STAT3-shRNA质粒转染明显抑制了，同时STAT3-shRNA质粒转染及 DIM均可抑制肿瘤细胞的粘附、侵袭及迁移能力，并显著低于对照组，差异有统计学意（p<0.05）。而STAT3-shRNA联合DIM组的抑制率显著高于STAT3-shRNA及DIM单独作用组，差异有统计学意义（p<0.05）。同时采用Western blot结果示：联合作用明显抑制p-STAT3的表达和下游相关蛋白VEGF、MMP-2及MMP-9的表达。　　结论：沉默JAK/STAT3信号转导途径与DIM联合作用，增加了抗卵巢癌细胞的生物活性，表现出更强且稳定的抗癌作用，DIM与shRNA STAT3联合抗卵巢癌作用具有明显的前景。