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目的:探讨地塞米松(DEX)对鼠抗血清引起的人足细胞损伤的保护作用及影响机制。方法:1.足细胞的培养与传代:细胞生长在含ITS(胰岛素5ug/ml、转铁蛋白5ug/ml和亚硒酸钠5ng/ml)、10%胎牛血清、100 U/ml青链霉素、100 mg/L链霉素的RPMI1640培养液中,在5%CO2、33℃培养孵箱传代培养。然后转入37℃、5%CO2培养孵箱分化培养至少14d后进行实验。分化成熟的足细胞以含1%胎牛血清RPMI1640培养基同步化处理12h用于实验。2.足细胞的分组与干预:将细胞分为以下4组:①正常对照组;②鼠抗血清(rat anti-serum,RA)(20μl/ml)组:RA(20μl/ml)组、RA+myosin9多肽(polypeptide,P)(20μl/ml)组,分别培养足细胞24h、48h、72h;③灭活鼠抗血清组:灭活RA(20μl/ml)组、灭活RA+正常鼠血清(20μl/ml)组,培养足细胞72h;④DEX(10-5mol/L)干预组:RA(20μl/ml)+DEX(10-5mol/L)组、RA(20μl/ml)+P(20μg/ml)+DEX(10-5mol/L)组,共同培养足细胞72h。用倒置显微镜及荧光显微镜观察足细胞形态,用Western印迹和RT-PCR法分别检测足细胞nephrin、myosin9和α-tubulin的表达。3.MTT[3-(4,5-二甲基-2-噻唑)-2,5-二苯基溴化四唑,简称噻唑蓝]法检测足细胞活力,其分组为:①正常对照组;②RA(20μl/ml)组;③灭活RA(20μl/ml)组;④灭活RA+正常鼠血清(20μl/ml)组;⑤ RA(20μl/ml)+P(20μg/ml)组;⑥ RA(20μl/ml)+DEX(10-5mol/L)组;⑦ RA(20μl/ml)+P(20μg/ml)+DEX(10-5mol/L)组,以上7组分别培养24h、48h、72h。结果:1.各种干预因素作用后人足细胞形态的变化与正常对照组相比,灭活的鼠抗血清对人足细胞形态无明显影响;灭活鼠抗血清加正常鼠血清组足细胞形态发生改变,细胞膜变形,胞浆减少;鼠抗血清单组作用组及鼠抗血清加多肽组足细胞形态均发生变化,细胞膜皱缩,足突减少,地塞米松干预后,可在一定程度上改善足细胞形态。2.鼠抗血清对人足细胞nephrin表达的影响与正常对照组相比,灭活的鼠抗血清对人足细胞nephrin蛋白及mRNA表达无明显影响(P>0.05);鼠抗血清作用24h、48h、72h后,与正常对照组比较,足细胞nephrin蛋白及mRNA表达逐渐下降,呈时间依赖性(P<0.05),72h表达最少。3.灭活鼠抗血清对人足细胞nephrin的表达的影响与正常对照组相比,作用72h后,灭活鼠抗血清作用组nephrin蛋白表达无明显变化(P>0.05),鼠抗血清单独干预组和灭活鼠抗血清加正常鼠血清组nephrin蛋白均表达减少(P均<0.05)4.鼠抗血清及myosin9多肽对人足细胞nephrin、myosin9及α-tubulin表达的影响与正常对照组相比,灭活的鼠抗血清对人足细胞nephrin、myosin9及α-tubulin蛋白及mRNA表达无明显影响(P>0.05);鼠抗血清及鼠抗血清加myosin9 多肽作用 72h 后,足细胞 nephrin、myosin9 及 α-tubulin 蛋白及 mRNA表达均明显下降(P<0.05或P<0.01)。5.地塞米松对鼠抗血清及鼠抗血清加myosin9多肽干预后的人足细胞nephrin、myosin9 及 α-tubulin 表达的影响与正常对照组相比,灭活的鼠抗血清对人足细胞nephrin、myosin9及α-tubulin蛋白及mRNA表达无明显影响(P>0.05);地塞米松可上调鼠抗血清单独干预及鼠抗血清加多肽共同干预的足细胞nephrin、myosin9及α-tubulin蛋白及mRNA 表达(P<0.05 或 P<0.01)。6.各种干预因素作用后足细胞活力的变化与正常对照组相比,灭活的鼠抗血清对人足细胞形态无明显影响(P>0.05);作用72h后,灭活鼠抗血清加正常鼠血清组、鼠抗血清单独干预组及鼠抗血清加多肽干预组足细胞活力均下降(P<0.05或P<0.01);地塞米松可在一定程度上改善鼠抗血清及鼠抗血清加多肽作用后人足细胞的活力(P<0.05)。结论:1.鼠抗血清及鼠抗血清加多肽均可使足细胞形态发生改变,细胞活力下降,nephrin、myosin9、α-tubulin 蛋白及 mRNA 表达下调。2.地塞米松作用后,在一定程度上恢复足细胞形态,改善细胞活力,上调nephrin、myosin9蛋白及mRNA表达,改善足细胞损伤。目的:探讨氟伐他汀(Flu)对高糖环境下人足细胞nephrin和血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ)表达的影响。方法:体外培养的永生化人足细胞,随机分为:(1)正常糖(NG,葡萄糖5.5mmol/L)对照组;(2)二甲基亚砜(DMSO,1mg/ml)对照组;(3)高糖(HG,葡萄糖30mmol/L)组:高糖分别刺激足细胞Oh、6h、12h、24h;(4)单独Flu(10-7～10-5M)组、HG+Flu(10-7,10-6M)组,分别作用 24h。用噻唑蓝[3-(4,5-二甲基-2-噻唑)-2,5-二苯基溴化四唑,简称MTT]检测各组细胞的活力。用Western印迹和放射免疫法分别检测以上各组足细胞nephrin及AngⅡ的表达水平。结果:MTT结果表明DMSO以及Flu浓度为10-7M和10-6M对足细胞活力较正常组无明显差异(P>0.05),而Flu浓度为10-5M组、HG组在24h可明显抑制足细胞活力(P<0.05),HG与Flu10-7M和10-6M共同作用24h较HG组足细胞活力明显改善(P<0.05)。与正常对照组相比,DMSO、单独Flu10-7M和10-6M作用24h后,nephrin表达无明显差异(P>0.05),单独Flu10-5M组nephrin表达明显减少(P<0.05)。高糖分别作用Oh、6h、12h、24h后,人足细胞AngⅡ表达显著增加,nephrin表达显著减少,呈时间依赖性(P<0.05);氟伐他汀可抑制高糖环境下人足细胞AngⅡ过表达,上调nephrin表达,在一定浓度范围内呈浓度依赖性(P<0.05)。结论:氟伐他汀可抑制HG环境下足细胞AngⅡ的表达,上调nephrin的表达,起到保护足细胞的作用。