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猪瘟病毒（classical swine fevev virus,CSFV）是严重危害养猪业的最重要的病原之一，E2蛋白是其主要的保护性抗原蛋白，因此是CSFV抗原性、抗原变异和血清学诊断抗原体外表达研究以及猪瘟（classical swine feve,CSF）亚单位标记疫苗研制的主要对象。本研究在大肠杆菌中高效表达了CSFV石门株E2基因。对表达的E2及mE2蛋白包涵体进行了复性和纯化，建立了复性和纯化方法。构建了CSFV石门株E2基因可溶性表达的重组质粒，并得到表达。结果如下： 1．利用PCR突变技术对猪瘟病毒石门株的E2基因进行了改造，将改造后的基因克隆到表达载体pET-28a（+）上，构建了重组质粒pETE2（SW），转入至宿主菌BL21（DE3）中，在IPTG的诱导下，重组菌可高效表达目的基因，表达量达菌体蛋白总量的28％。 2．超声破菌分离表达的CSFV E2蛋白和mE2蛋白包涵体，用8mol／l尿素变性溶解，利用TalonTM metal affinity Resin和QAE-Sephadex A-50离子交换层析对变性溶解的E2蛋白进行纯化。利用谷胱甘肽再氧化法分别对mE2蛋白包涵体和E2蛋白包涵体的纯化产物进行复性，经硫酸铵盐析沉淀或聚乙二醇（PEG）20000浓缩后，离心获得可溶性E2和mE2复性蛋白，其复性率分别达到为 19～39％和70％。复性蛋白经Talon” metal affinityResin或免疫亲和层析纯化后，纯度分别达到90％和 97％左右。riJ接ELISA 检测表明，与变性蛋白相比，其与CSFV特异抗体的反应活性均有显著提高，其中复性mEZ 蛋白与CSFV 的一组特异的单抗和多克隆血清的ELISA反应值比变性毗 蛋白的提高了2～16倍。 3．将EZ 基因克隆至PEZZ18 表达载体中，构建了重组质粒民小。将该质粒转化HB101受体菌，培养后该重组菌可表达EZ基因，表达产物为可溶性的融合蛋白，存在于培养基上清中。