垂体腺瘤是临床内分泌和神经外科中的常见病变，发病率约占颅内肿瘤的15％，虽然绝大多数为良性肿瘤，但有三分之一为侵袭性，更有一少部分可能转变为恶性。虽然垂体腺瘤的发病机制尚未完全阐明，但目前基本认为，垂体腺瘤的发展可分为两个阶段一起始阶段和促进阶段，即垂体细胞首先发生突变，然后在内外因素的促进下突变的细胞增生、发展为垂体腺瘤。随着对垂体旁分泌网络研究的不断深入，人们逐渐认识到垂体前叶细胞间的旁分泌网络在调节垂体前叶细胞分泌功能、细胞间通讯以及细胞增殖调控中起着重要作用。 乙酰胆碱（acetycholine，Ach）是垂体旁分泌网络的重要成员之一。目前资料表明，垂体前叶主要的几种功能性细胞表面都表达乙酰胆碱M型受体，Ach可以通过不同的途径影响多种动物垂体前叶细胞生长激素（growthhormone，GH）、催乳素（prolactin，PRL）等激素的分泌，提示Ach在调节垂体前叶细胞分泌中发挥着重要作用。但Ach对垂体前叶几种功能性细胞增殖代谢、凋亡的调控尚未见研究报导。深入研究和探讨Ach的这种调控作 窜囚旱巨大学协士学位论文 用，是理解Ach影咱垂体前叶细胞分泌功能的基础，其结果不仅有助于充 分认识垂体前叶的旁分泌网络，而且，对于了解垂体腺瘤的发生、发展也 将产生积极的影响。 在体情况下，ACh主要在胆碱能神经细胞的终末合成，并在神经冲动 到来时释放，然后很快被酶水解或回摄，很难作远距离扩散。而实验证明 多种动物的正常垂体前叶细胞及肿瘤细胞都可以合成及分泌Ach，提示 Ach能以自分泌或旁分泌的方式在垂体内起作用。因此，人的正常垂体和 垂体腺瘤内是否存在合成 Ach所必需的醇胆碱乙酞转移酶＊holine aceql transferase，ChAT），Ach对垂体腺瘤细胞的增殖是否有影咱，以及＾oh通 过何种途径起作用等则是研究Ach对人的垂体和垂体腺瘤影响的关键所 在。 本实验应用免疫组织化学、My’和‘H．TdR参入法、流式细胞仪检测 法、共聚焦显微镜检测细胞厂；方法、IU’ca－－L以及放免等方法研究了 CMT在人正常垂体和三种垂体腺瘤（催乳素瘤、生长激素瘤和无功瘤） 的表达：观察了ACh对三种垂体腺瘤细胞增殖和代谢的影响，并初步分析 了其作用机制。 结果表明： 1．兔疫组织化学方法显示三种垂体腺瘤细胞中存在ChAT免疫阳性物 质，ChAT免疫阳性物质存在于细胞的胞浆中。在人正常垂体前叶细胞 中同样也存在ClotT免疫阳性物质。这表明人正常垂体前叶和实验所 观察的三种垂体腺瘤细胞中具有合成Ach的关键酶。说明Ach可以在 垂体前叶细胞内和／或垂体腺瘤细胞内合成并释放，由于垂体前叶细胞 表面存在看功能性的M型胆碱能受体，提示Ach可以在垂体前叶内和／ 或垂体腺瘤内以旁分泌或自分泌的形式起作用，影响着垂体前叶细胞 的分泌功能及其细胞的增殖与分化。 2．采用 My和D＊dR参入实验表明，Ach能抑制三种垂体腺瘤细胞的 增殖和DNA的合成，其抑制作用的程度与Ach的作用浓度有关，并呈 剂量依赖效应（P＜0．of）。此抑制作用可被 M受体桔抗剂阿托品阻 断，却不能被N受体桔抗剂氯化简箭毒阻断。M受体的激动剂碳历胆 2 第四旱医大学博士＊位论文 碱对三种垂体腺瘤细胞增殖和代谢的同样具有抑制作用（P＜0刀1）。 提示ACh对垂体腺瘤细胞增殖和代谢的抑制作用是通过M型受体起作 用的。 3．流式细胞仪检测细胞周期的结果表明，培养的三种类型垂体腺瘤细胞 在10“’molAIAch的条件下培养24h后，G；期的细胞比例从对照组的 O8．2土3．9）％上升为四3．3士4．1）％；s期的细胞比例从对照组的（12．2土 3．l）％下降为仅．6土1．6）％；GZ期的细胞比例从对照组的＊．6土2．8）％下 降为＊l土 2刀）％。表明 10”’moWAch能减少垂体腺瘤细胞进入 S、G。 期的细胞比例，而使处于0；期的细胞比例增加（P＜0．01）。而在A。h （l”’mow）加阿托品＊”hoffe）的条件下培养 24h后的细胞比例与对 照组相比无明显差异（Raf刀5）。 4．用共聚焦显微镜方法显示加入 Ach＊”hoffe）后，立80观察到垂体腺瘤 细胞厂 1；相对水平降低。 5．用放射免疫方法证明三种类型的人垂体腺瘤细胞对照组细胞内cANrp 和CGMP的浓度分别为l．58上0．31。OI／L和0．96f0．Zll