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实验一:ACE基因I/D多态性和急性肺损伤发生及预后的关系
目的:探讨血管紧张素转换酶(ACE)基因插入/缺失(I/D)多态性和本地区汉族人群急性肺损伤(ALI)发生与预后之间的关系。方法:101例ALI患者、408例非ALI患者以及236例健康志愿者纳入研究,PCR检测研究对象的ACE基因I/D多态性。比较不同基因型(Ⅱ,ID,DD)和等位基因(I,D)分布频率在三组间的差异。比较不同基因型ALI患者急性生理和慢性健康评估(APACHE)Ⅱ评分、序贯器官衰竭评估(SOFA)评分、肺损伤评分、器官损伤数目、机械通气时间、血管活性药物使用时间、ICU住院时间以及28天病死率。检测ALI患者血浆ACE活性及炎症介质白介素(IL)-6水平。结果:ACE基因三种基因型(Ⅱ,ID,DD)和等位基因(I,D)的分布频率在ALI组、非ALI组及健康对照组间差异无统计学意义(DD型在三组的分布分别为:13.8%、10.1%、9.8%;D等位基因在三组的分布分别为:34.2%、35.7%、32%),P>0.05。DD基因型ALI患者APACHEⅡ评分(19.7±8.7分)高于Ⅱ型(15.6±6.2分),P<0.05。在ALI不同基因型患者间,SOFA评分、肺损伤评分、器官损伤数目、机械通气时间、血管活性药物使用时间及ICU住院时间差异无统计学意义。Kaplan-Meier生存分析结果显示DD型患者28天病死率为64.3%,显著高于Ⅱ和ID两组(分别为17.4%和26.8%),P=0.013。不同ACE基因型ALI患者血浆ACE活性和炎症介质IL-6水平组间差异无统计学意义。结论:ACE基因I/D多态性与本地区汉族人群ALI易感性无显著相关,但与ALI患者疾病严重程度及预后相关,DD型患者预后可能更差。
实验二:I/D多态性对脂多糖刺激的单个核细胞ACE基因表达的影响
目的:探讨血管紧张素转换酶(ACE)基因插入/缺失(I/D)多态性对脂多糖(LPS)刺激的外周血单个核细胞(PBMC)ACE基因表达影响。方法:PCR检测健康志愿者ACE基因I/D多态性。Ficoll密度梯度法提取不同ACE基因型健康者PBMC(Ⅱ型6例、ID型6例、DD型6例),调整细胞数到1×106/ml,细胞混悬液1ml接种24孔细胞培养板,在LPS终浓度为0.1μg/ml干预下共培养。半定量RT-PCR法检测培养6h细胞ACEmRNA表达量。比色法检测培养24h细胞培养上清ACE活性。结果:在LPS刺激6h后,DD组PBMC ACE mRNA表达量为(30.55±13.14)%,高于Ⅱ组(15.92±6.11)%和ID组(18.76±8.69)%,P=0.038。LPS刺激24h后,DD组PBMC培养上清ACE活性(60.67±24.55U)高于Ⅱ组(33.33±13.32U)和ID组(46.31±16.30U),P=0.01。结论:I/D多态性影响PBMC体外LPS刺激后ACE基因的表达,DD型有更高水平的ACE mRNA表达和ACE活性。