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目的:黄芩苷(Baicalin,BA)为中药黄芩的主要成分之一,具有清热解毒、抗氧化、抗炎、抗肿瘤等广泛药理作用。但其水溶性差、口服难吸收,生物利用度低等不足限制了其临床应用。对此,我们用“绿色合成方法”制备了BA衍生物BAD和BAL,并进行体内外抗肿瘤作用评价。方法:1.采用“绿色化学”思路合成BAD和BAL,并通过紫外分光光度法(UV)、高效液相色谱法(HPLC)、薄层色谱(TLC)、核磁共振谱(NMR)及质谱(MS)对其结构进行表征。2.紫外分光光度法测定BA、BAD和BAL分别在1640培养基、含10%胎牛血清的1640培养基以及pH 7.2的PBS水溶液中的水解稳定性。3.MTT法检测BA、BAD和BAL分别对三株肺癌细胞(A549、H460、Calu-1),三株肝癌细胞(BEL-7402、SMMC7721、HepG2)以及三株乳腺癌细胞(MDA-MB-435、MCF-7、T74D)作用24 h和48 h的增殖抑制活性。4.流式细胞仪检测BA、BAD和BAL对A549肺癌细胞的凋亡作用。5.构建人肺癌细胞株A549裸鼠皮下移植瘤模型,通过测定肿瘤生长情况,动物体重变化,抑瘤率以及HE染色观察药物对肿瘤的影响,考察BA、BAD和BAL抗肿瘤作用。结果:1.首次成功合成BA的衍生物BAD和BAL,其UV最大吸收波长分别278.4 nm(BA)、282.4 nm(BAD)和282.6 nm(BAL),HPLC归一化含量大于95%,TLC的Rf为0.45,ESI-MS m/z确证分子量为608,~1H NMR确证的结果:(400 MHz,DMSO)δ8.08(s,1H),7.98(s,1H),7.83(t,J=13.7 Hz,1H),7.54(s,1H),7.38(d,J=17.5 Hz,1H),7.12(d,J=6.4 Hz,1H),6.97(d,J=8.4 Hz,1H),6.88(d,J=6.6 Hz,1H),3.87(d,J=12.9 Hz,2H),3.80(s,4H),3.64(s,2H),2.15(s,3H)。2.BA、BAD和BAL分别在三种介质中作用24 h的未降解百分率依次为84.73-92.75%、84.63-91.12%和85.59-92.70%。3.BA、BAD和BAL分别对肺癌细胞A549、H460、Calu-1作用24 h的IC-50(μg/ml)为:BA:80.31±3.47、109.10±4.21、46.59±3.10,BAD:28.04±1.43、37.19±0.88、37.83±2.94,BAL:34.71±1.78、49.57±2.49、31.93±2.91;48 h的IC-50(μg/ml)为:BA:63.55±2.51、51.96±1.46、26.37±0.75,BAD:37.30±1.49、55.20±1.69、37.61±1.09,BAL:27.96±1.68、38.86±1.57、26.13±1.32。对肝癌细胞SMMC7721、BEL-7402、HepG2作用24 h的IC-50(μg/ml)为:BA:56.93±3.67、87.62±4.13、52.18±2.72,BAD:41.25±2.83、-、-,BAL:33.50±2.07、39.89±3.12、-;48 h的IC-50(μg/ml)为:BA:40.71±1.09、53.68±2.19、-,BAD:32.28±1.02、44.45±1.53、-,BAL:33.50±2.07、39.89±3.12、-。对乳腺癌细胞MDA-MB-435、T74D、MCF-7作用24 h的IC-50(μg/ml)为:BA:50.00±3.33、66.14±2.07、62.96±3.13,BAD:124.38±4.96、28.89±1.73、47.34±3.47,BAL:83.53±4.14、25.10±1.07、43.58±3.56;48 h的IC-50(μg/ml)为:BA:18.61±0.56、29.08±0.72、28.60±0.75,BAD:83.25±1.91、24.33±0.53、39.54±1.31,BAL:-、21.93±0.55、32.90±0.77。4.不同药物浓度的BA(25、50、75μg/ml)对肺癌细胞A549的早期凋亡百分率(%)分别为:6.46、11.28、12.87;不同药物浓度的BAD(10、25、50μg/ml)对肺癌细胞A549的早期凋亡百分率(%)分别为5.93、9.49、14.39;不同药物浓度的BAL(10、25、50μg/ml)对肺癌细胞A549的早期凋亡百分率(%)分别为11.92、13.99、34.53。5.与BA(抑瘤率:15.54%)比较,BAD和BAL均能抑制肺癌细胞A549裸鼠皮下瘤的生长,其抑瘤率为44.68%和65.27%。另外,各给药组之间裸鼠体重未见显著性差异,肿瘤块HE染色结果提示给药组的肿瘤细胞虽未见明显的形态学改变,但其微血管丰富程度依次为:空白组≥BA组>BAD组>BAL组。结论:1.本论文合成的BA衍生物BAD和BAL,结构新颖,国内外未见文献报道,拟申请发明专利。2.与BA比较,BAD和BAL在三种介质中均比较稳定,未见显著性差异(P>0.05)。3.与BA比较,衍生物BAD和BAL对多种肿瘤细胞具有良好的增殖抑制活性,对肺癌细胞A549、Calu-1,肝癌细胞SMMC-7721、BEL-7402,乳腺癌细胞T74D均较为敏感。4.BAD和BA促进肺癌A549细胞早期凋亡未见显著性差异(P<0.05)。与BAD和BA比较,BAL具有显著差异(P<0.05),同时能大幅度提高促进肺癌A549细胞早期凋亡的百分率且具有浓度依赖性。由此提示,BAL可能是通过促进肺癌细胞凋亡达到抗肿瘤作用,另外抗肿瘤机制还需进一步研究。5.与BA比较,BAD和BAL显著提高其抗肿瘤活性。