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该实验采用氯化钙沉淀法获得肝微粒体进行体外测定P450同工酶的活性,该方法是经典的测定P450酶的方法,国内外均已有文献报道.该方法的优点是,简便易行,适合所有由P450代谢的化学物质的代谢研究,排除其他因素的干扰,直接观察酶对底物的选择性代谢,为整体试验提供可靠的理论依据.且当一些对人体有较大损害的物质不适合进行整体试验时,该方法无疑是成为很好的替代方法.实验内容:第一部分:金纳多(EGB-761)对大鼠肝微粒体P450酶活性的影响目的:研究银杏叶制剂金纳多(EGB-761)对大鼠肝脏药物代谢酶CYP450的影响.方法:雄性SD大鼠按体重随机分为100mg/kg、60mg/kg、30mg/kg、15 mg/kg,5mg/kg五个剂量组、正常对照以及阳性对照组.给药组分别根据体重将不同剂量的金纳多(10mg/m1)连续灌胃5天,正常对照组给予2 ml/只的生理盐水连续5天,阳性对照组连续腹腔注射苯巴比妥钠(70mg/kg)4天.运用紫外分光光度法和荧光分光光度法测定大鼠肝微粒体中蛋白质含量、P450的含量以及与药物代谢关系尤为密切的CYP3A,CYP1A和CYP2B的活性.第二部分:鉴定金纳多(EGB-761)对细胞色素CYP1A蛋白表达的影响.目的:进一步鉴定金纳多(EGB-761)对肝脏P450特异同工酶CYP1A蛋白含量的影响以及与相应酶活性的关系.