桑色素锌(Ⅱ)、镉(Ⅱ)、钴(Ⅱ)配合物与DNA的作用机理及DNA电化学传感器的研究

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合成了三种桑色素过渡金属配合物,通过元素分析及红外光谱对其结构进行了表征。利用电化学的方法研究了这些化合物与DNA的作用机理,优化了最佳反应条件。运用核酸杂交技术,分别选用电化学活性高的桑色素镉(II)和桑色素钴(II)作为指示剂制备了DNA电化学传感器,用于识别和测定互补的DNA片断。采用共价键合法对电极表面进行修饰,制备成DNA探针,并将DNA探针应用于靶序列DNA片断的识别,具有良好的选择性,可用于实际样品的分析。共分为三部分。(1)合成了桑色素锌(II)配合物Zn(C15H907)2"3H20(简写为ZnL2),通过元素分析和红外光谱对其结构进行了表征;在O.2 mol·L-1的HAc—NaAc(pH 5.O)缓冲溶液中用电化学分析方法研究了ZnL2与鲑鱼精DNA的相互作用。结果表明,ZnL2与DNA的作用方式为嵌插结合,ZnL2与DNA结合反应的化学计量系数为0.5,结合常数为4.15x104L0.5.mol-0.5。优化了结合反应条件,在最佳条件下,ZnL2氧化峰电流的下降值与DNA的浓度在2.27x10-5~1.73x10-4mol·L-1的范围内呈良好线性关系,检出限为6.15x10-7mol·L-1(S/N=3)。(2)合成了桑色素镉(Ⅱ)配合物Cd(C15H9O72·2H20(简写为CdL2),通过元素分析和红外光谱对其进行了表征。在0.20 mol-L-1的Tris-HCI(pH 5.8)缓冲溶液中,运用电化学分析法研究了CdL2与鲑鱼精DNA的相互作用。结果表明CdL2姐过嵌插作用与DNA结合,实验求得结合反应的化学计量系数m=1.76(m≈2),结合常数Ka=1.2×108 L2.mol-2 .以CdL2作为杂交指示剂,利用共价键合法成功制备了DNA电化学生物传感器,该传感器检测大肠杆菌病毒的线性范围为2.69×10-8~9.16×10-7mol·L-1,检测限为9.30×10-9mol·L-1(S/N=3)。(3)合成了桑色素钴(II)配合物Co(C15H9O7)2·3H20(简写为CoL2),通过元素分析和红外光谱对其进行了表征。在0.20 tool·L-1的PBS(pH 6.O)缓冲溶液中,运用电化学分析法研究了CoL2与鲑鱼精DNA的相互作用。结果表明CoL2通过嵌插作用与DNA结合,实验求得CoL2与DNA结合反应的化学计量系数m=2.12 (m≈2),结合常数Ka=3.59×109L2.mol-2。用带有羧酸基团的多壁碳纳米管(MWCNTs—COOH)修饰玻碳电极,将5’端氨基修饰的核苷酸通过羧基共价固定在碳纳米管上,利用CoL2作为杂交指示剂,制备了一种新颖、灵敏的DNA电化学传感器。检测大肠杆菌病毒的线性范围为7.47×10-10~5.00×10-8mol·L-1,检出限为8.2×10-11mol·L-1(S/N=3)。与把核苷酸直接固定在玻碳电极上的DNA电化学传感器相比,该传感器具有更高的灵敏度和更低的检出限。
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