论文部分内容阅读
在多细胞组织不同发育阶段和不同外界环境刺激变化过程中，单个基因通过选择性剪接可以产生功能不同的蛋白，因此选择性剪接是基因表达调控的一种机制。Bcl-X是Bcl-2家族成员之一，在细胞增殖、分化、凋亡过程中起着很重要的作用，Bcl-X通过选择性剪接可以产生几种mRNA异形体，特别是Bcl-X_L和Bcl-Xs，因为它们编码蛋白在细胞凋亡过程中具有相反的作用。然而，在外界因子调控细胞生长、凋亡和分化过程中，对Bcl-X前体mRNA是如何被调节还不是十分清楚。 本研究探讨了IL-6(白介素-6)、GM-CSF(粒细胞巨噬细胞集落刺激因子)、IL-11(白介素-11)和TPA(佛波脂)在K562细胞和U251细胞中对Bcl-X前体mRNA选择性剪接的调控作用，同时鉴定TPA和DMSO(二甲亚砜)对人肺腺癌GLC细胞的诱导分化作用以及对Bcl-X选择性剪接的影响。 实验结果如下： (一) 结果表明，TPA和DMSO诱导GLC细胞后，GLC细胞增殖明显受到抑制，细胞抑制率为25％-45％，分裂指数下降到26‰。光镜、扫描电镜、透射电镜结果显示，经过TPA和DMSO诱导后，GLC在形态和结构上趋于正常。细胞体积变大，核质比下降，线粒体大小和结构趋于一致，高尔基体趋于典型，内质网增加，微绒毛和丝状伪足减少。此外，RT-PCR和Western blot结果表明TPA和DMSO抑制Bcl-X_L保留，TPA和DMSO诱导GLC细胞剪接趋向于Bcl-Xs。 (二) TPA能够激活PKC信号系统调节Bcl-X选择性剪接。结果表明TPA能够增加U251中Bcl-X_L保留，TPA这种生物学效应能够被PKC活性抑制剂灯盏花乙素所抑制，但是灯盏花乙素却能够促进Bcl-X_L跳跃。为了鉴定参与选择性剪接的调控元件，构建PL53In-Bcl-X缺失和突变载体，结果表明内含子中581-789碱基之间的序列是TPA应答效应所必须的，789-894碱基之间序列可能是TPA作用的抑制元件，这就表明Bcl-X前体mRNA5′上游和下游剪接位点可能被PKC信号系统调控。 (三) 验结果显示，IL-6和GM-CSF能够抑制Bcl-X_L保留，IL-6作用K562细胞后，Bcl-X_L保留由60％下降到20％，GM-CSF作用K562细胞后同样能够诱导