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血管生成,即新生血管的形成,是实体肿瘤组织得以侵润性生长和发生转移的必要条件.寻找和应用高效低毒的血管生成抑制因子(Angiogenesis inhibition factor,AIF),抑制血管生成,切断肿瘤的营养供给和转移途径,从而达到抑制肿瘤、治疗肿瘤的目的,是当前肿瘤研究的生长点之一.血管生成抑制素(Angiostatin,AGN)是新发现的AIF,是纤溶酶原(Plasminogen,PLG)的一个内片段,能特异性地抑制内皮细胞增殖,并高效抑制血管生成和肿瘤的生长与转移,有开发应用前景.一、hAGN基因的扩增、克隆及序列分析;二、hAGN在大肠杆菌中的表达、产物的纯化及生物活性分析;三、hAGN基因在酿酒酵母中的分泌表达、产物的纯化和生物活性分析.综上所述,该文应用PCR方法扩增了hAGN基因,克隆并进行序列分析证明序列正确后,构建了两个大肠杆菌表达质粒pETA2和pBVA2,分别引入E.coliBL21(DE3)和E.coliDH5α后,高效表达hAGN融合蛋白和hAGN;同时构建了一个酵母分泌型表达质粒pYADEMA18,引入S.cerevisiae JG1107中实现了hAGN基因在酿酒酵母中的分泌表达.免疫印迹法证明表达产物均具有免疫活性.将重组蛋白纯化到电泳一条带,纯度在96%以上.通过鸡胚CAM活性分析或抑瘤实验证明纯化的表达产物具有生功能.该研究为获得大量hAGN,进行深入的抗瘤作用研究以及未来的临床试验奠定了基础.