凡纳滨对与生长繁殖相关的遗传标记的筛选

来源 :上海海洋大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:atianjun
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凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)又称南美白对虾,原产于中南美洲,自然分布于东太平洋美洲沿岸。因其具有生长速度快、抗病能力强、营养丰富、肉味鲜美等优点,目前成为世界养殖产量最高的三大虾种之一。但近年来,由于病毒病害流行、水质不断恶化以及一些养殖户不规范地引种、导种等,凡纳滨对虾在养殖过程中,出现种质衰退的现象。为了合理保护和充分利用优良凡纳滨对虾的种质资源,获得优良性状稳定遗传的新品种,本研究从数量遗传学和分子生物学两个方面,探究影响凡纳滨对虾体重的主要形态性状,筛选与生长和繁殖相关的遗传标记,以期为凡纳滨对虾的遗传改良提供参考。在数量遗传学方面,运用单因素方差分析、通径分析和多元回归分析等方法,比较了V101、OS、NS、GD2四个凡纳滨对虾种群的头胸甲长(L1)、第1~6腹节长(L2-L7)、尾节长(L8)、体长(L9)、全长(L10)、头胸甲宽(W1)、第1~6腹节宽(W2-W7)、头胸甲高(H1)、第1~6腹节高(H2-H7)等24项形态性状和体重m及其所有性状的比例参数,分析了各群体形态差异以及主要形态性状对体重的影响,并建立了回归方程。结果表明:四个群体大部分形态差异显著(p<0.05),v101和gd2群体属于瘦长型,os和ns属于高胖型。相关分析、通径分析、决定程度分析结果表明:除ns群体尾节长相关不显著(p>0.05)外,其他所有群体形态性状与体重均呈显著相关(p<0.05)或极显著相关(p<0.01)。v101群体头胸甲长和头胸甲高与体重正相关,第2腹节高与体重负相关;os群体体长、第2腹节长、头胸甲宽与体重正相关,第6腹节长与体重负相关;ns群体头胸甲长、第6腹节高与体重正相关,头胸甲宽与体重负相关;gd2群体头胸甲长、全长与质量正相关,体长与体重负相关。四个群体的多元回归方程经方差显著性检验均达到极显著水平(p<0.01),且复相关指数均>0.85,表明头胸甲部位在凡纳滨对虾良种选育中占重要地位。在分子生物学方面,本研究从基因组和转录组水平上,寻找与凡纳滨对虾生长和繁殖相关的遗传标记,通过比较不同基因型数量性状均值是否存在显著差异,来发掘与数量性状具有连锁关系的标记,这将大大加速遗传育种的进程。在生长标记筛选方面,本研究选取美国塞班岛凡纳滨对虾养殖基地gd1群体,利用本实验室筛选的多态良好的8对微卫星引物,对gd1群体92个个体进行扩增,8对引物都可以稳定扩增出清晰的dna条带,并在不同个体间表现出不同程度的多态性。扩增片段大小为126bp-258bp,有效等位基因数为1.28~2.53,观测杂合度为0.25~0.64,期望杂合度为0.22~0.61,其中,有3个位点多态信息含量(pic)大于0.5,表现为高度多态,3个位点0.25<(pic)<0.5,表现为中度多态,2个位点(pic)<0.25,表现为低度多态,统计结果显示,凡纳滨对虾gd1群体大多处在中高度多态水平,这将为后续与生长相关的微卫星标记的筛选奠定基础。通过多态性不同的微卫星标记与92尾凡纳滨对虾生长性状(体重、头胸甲长)关联分析,发现标记tum-6.124与体重极显著相关(p<0.01),其他微卫星标记与体重和头胸甲长相关不显著(p>0.05),并发现标记tum-6.124的优势基因型aa。将微卫星标记tum-6.124在v101与ns两个群体中进行验证,结果显示:微卫星标记tum-6.124与体重在两个群体中均差异极显著(p<0.01),且aa基因型均为优势基因型。在繁殖标记筛选方面,本研究选取美国塞班岛凡纳滨对虾养殖基地os群体,从中挑选产卵性能良好的凡纳滨对虾25只,产卵性能一般的凡纳滨对虾25只,不产卵的凡纳滨对虾25只,作为筛选与繁殖相关遗传标记的模板。对72对est-ssr分子标记经过梯度pcr检测和退火温度优化,筛选出42对具有清晰扩增条带的基因标记,其中12对est微卫星标记具有较好的多态性,可作为凡纳滨对虾遗传分析的基础标记。将多态良好的12对est-ssr标记与凡纳滨对虾的繁殖指标结合,为了消除体重的影响,繁殖指标设为单位体重产卵量。产卵与未产卵的差异分析结果显示,引物v-3差异极显著(p<0.01),引物v-3有三种基因型,ab、bb、bc,产卵与未产卵的比分别为:20:1、15:11、15:13,推测AB基因型可能与产卵相关,其他标记均差异不显著(P>0.05)。将产卵的50只凡纳滨对虾单独分析,结果显示标记V-15的单位体重产卵量差异极显著(P<0.01),Duncan法多重比较,结果显示标记V-15的BB、DD基因型的单位体重产卵量显著高于CD、BC且高于平均值,为优势基因型;其他11对EST-SSR标记差异不显著(P>0.01)。将V-15在GD2群体中验证,发现BB、DD基因型较CD、BC依然为优势基因型。综上所述,本研究为凡纳滨对虾对虾人工化养殖、生长繁殖性状改良提供一定的理论依据,对实际育种工作具有一定的指导意义。
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