Toehold介导链置换和银纳米簇技术在生物和环境检测中的初步应用

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随着社会进步和生活水平的提高,人们对健康要求越来越高。我们知道,生物大分子参与许多重要的生物过程。一些生物大分子的改变可能预示着某些生理过程不可逆地转变或疾病的发生,同时,影响健康的还有环境因素,尤其是环境中重金属对人具有极强的危害作用,即使是以痕量形式存在。因此,对于生物分子和环境重金属的检测在疾病诊断,环境安全等民生领域具有极为重要的意义。目前,Toe hold介导的链置换技术因其操作简便,成本适中,在生物计算机和生物分子检测中受到极大关注;而银纳米簇合成技术因其高的量子产率和良好的光稳定性,在新材料合成及样品分析中显得越来越重要。基于此,本论文利用To e ho ld介导的链置换和银纳米簇技术,研制新型生物大分子和重金属检测体系并进行了初步应用研究。具体工作如下:  1、建立了To e ho ld介导的链置换-微球捕获的点突变荧光检测方法。许多遗传性疾病的发生发展与点突变密切相关,点突变的准确检测对这些疾病的预防、临床检测和分子诊断有重大意义。目前基于荧光偏正等技术的To e ho ld介导链置换方法能快速实现点突变检测,但是需要昂贵的荧光偏正等检测系统。本论文基于To e ho ld介导的链置换技术和微球介导的捕获技术,设计了一种新的检测体系,实现了点突变准确快速的研究。该方法能对各种点突变类型进行检测,而且操作简便,不需要昂贵仪器,也不需要电泳、离心、分离、加酶等复杂繁琐的步骤,有望在临床检测和应用上发挥重要作用。  2、建立了基于G-rich的银纳米簇信号放大的核酸外切酶(Exo nuc lease I)的检测方法。Exonuc lease I酶从核苷酸链的一端开始逐个水解核苷酸,在分析核酸的结构差异,测定基因组 DN A中的特定位点及某些重要的生物过程中具有重要意义。传统检测酶的凝胶电泳、比色法、放射性标记法以及酶联免疫吸附沉淀法等方法,往往需要复杂操作过程或昂贵设备。本论文基于G-r ic h能极大增强银纳米簇荧光信号的特点,建立了一种新型的酶检测体系,实现Exonuc lease I的快速灵敏检测。该方法的灵敏度为0.05U/mL,而且具有较好的检测特异性,不需要复杂繁琐的操作和昂贵的仪器设备,为蛋白质酶的分析研究提供了一种好的检测策略,同时为酶活性的抑制剂筛选提供了一种有效的方法。  3、建立了To e ho ld介导链置换-银纳米簇的汞离子检测方法。汞离子对于人类的健康和环境有着严重危害,检测环境中汞离子的含量对于人类生态治理、污水排放、工业和生活用水等各方面都有着重要意义。传统的汞离子主要是基于光谱或质谱的检测方法,仪器设备庞大且价格高昂,且对样品的纯度、制备等要求较高,对即时检测的需求很难满足。本论文基于To e ho ld介导链置换技术和银纳米簇信号放大技术,建立了新型检测汞离子的方法。它操作简便、成本较低、而且能实现实际水样中的汞离子的检测,为环境中重金属离子的即时监测提供了一个好的策略。
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