Y27632,Taxol和db-cAMP联合应用促进脊髓损伤后新生SD大鼠背根神经节神经元轴突生长的体外实验研究

来源 :西南医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:chenxinguohn
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目的:观察Y27632,Taxol和db-cAMP联合应用在模拟脊髓损伤微环境下对于新生SD大鼠背根神经节神经元轴突再生的影响。方法:(1)成年雌性SD大鼠截瘫改良Allen模型制作:实验随机分组:手术组6只、假手术对照组6只、对照组6只;按改良Allen法制作T9完全性截瘫模型,1w后取T8T10脊髓通过分离、过滤形成组织匀浆制备脊髓提取液;(2)新生SD大鼠背根神经节神经元分离、培养和鉴定;(3)实验1:分组培养2d,通过免疫荧光染色技术,测量轴突生长平均长度、轴突远端平均微管荧光密度,观察完全性截瘫大鼠脊髓提取液是否对轴突生长影响(A组,DRGNs+50μl PBS;B组,DRGNs+50μl对照组大鼠脊髓提取液;C组,DRGNs+50μl假手术组脊髓提取液;D组,DRGNs+50μl手术组脊髓提取液)。实验2:分组培养1d、2d,通过免疫荧光染色技术,测量轴突生长平均长度、轴突远端平均微管荧光密度,观察在模拟脊髓损伤微环境下Y27632、Taxol、db-cAMP分别与联合应用是否对轴突生长影响(A组,DRGNs+50μl PBS;B组,DRGNs+50μl完全性截瘫大鼠脊髓提取液;C组,DRGNs+50μl完全性截瘫大鼠脊髓提取液+30μM Y26732;D组,DRGNs+50μl完全性截瘫大鼠脊髓提取液+2nM Taxol;E组,DRGNs+50μl完全性截瘫大鼠脊髓提取液+50μM db-cAMP;F组,DRGNs+50μl完全性截瘫大鼠脊髓提取液+30μM Y26732+2nM Taxol+50μM db-cAMP)。结果:(1)实验1:共同培养2d后,轴突生长平均长度,A组为142.8±5.4μm,B组为137.2±3.9μm,C组为144.3±3.8μm,D组为47.6±3.3μm。单因素方差分析示:D组与A、B、C组之间,P<0.01,有显著统计学差异。轴突远端平均微管荧光密度,A组为175.3±2.7AFU/μm,B组为195.6±2.3AFU/μm,C组为195.4±2.2AFU/μm,D组为65.0±1.6AFU/μm。D组与A、B、C组之间,P<0.01,有显著统计学差异。(2)实验2:共同培养1d后,轴突平均长度,A组为136.9±4.2μm,B组为47.4±4.1μm,C组为157.3±5.8μm,D组为135.3±4.7μm,E组为157.1±4.3μm,F组为175.9±4.9μm。单因素方差分析示:B组与A、C、D、E和F组之间,P<0.01,有显著统计学差异。2d后,轴突平均长度,A组为142.5±1.9μm,B组为44.3±2.4μm,C组为165.1±2.8μm,D组为143.4±3.9μm,E组为165.3±3.3μm,F组为190.8±3.1μm。单因素方差分析示:B组与A、C、D、E和F组之间,P<0.01,有显著统计学差异。D组与C、E和F组之间,P<0.05,有显著统计学差异。F组与A、B、C、D和E组之间,P<0.01,有显著统计学差异;A组与D组之间,P>0.05,两者无统计学差异;C组与E组之间,P>0.05,两者无统计学差异。轴突远端平均微管荧光密度,A组为180.8±3.4AFU/μm,B组为60.6±2.7AFU/μm,C组为394.6±3.3AFU/μm,D组为202.1±2.1AFU/μm,E组为364.4±2.8AFU/μm,F组为475.7±3.4AFU/μm。B组与A、C、D、E和F组之间,P<0.01,有显著统计学差异。F组与A、B、C、D和E组之间,P<0.01,有显著统计学差异;C组与E组之间,P>0.05,两者无统计学差异。结论:(1)完全性截瘫大鼠脊髓提取液对新生SD大鼠DRGNs轴突生长有抑制作用,通过前期实验结果,也表明完全性截瘫大鼠脊髓提取液可模拟脊髓损伤的微环境,抑制新生SD大鼠DRGNs轴突再生;(2)单独应用适合剂量的Y27632、Taxol和db-cAMP能促进轴突再生,生长锥形成。联合应用Y27632,Taxol和db-cAMP对新生大鼠DRGNs轴突生长促进作用比单一应用更为明显,形成多个分支、甚至神经网,生长锥更加粗大。
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