【背景和目的】在泌尿生殖系统中,膀胱癌是最为常见的恶性肿瘤,并且发病率逐年上升。2010年,仅仅在美国大约有70530名新的患者,并且有14680个患者死于膀胱癌。目前膀胱癌分型中,最常见的是移行细胞癌,鳞癌、腺癌,其他筛检的分型仅占一小部分。膀胱癌已经严重的影响了人们的工作和生活。一方面,在膀胱癌诊断、治疗、复发监测和治疗相关并发症的过程中需要昂贵的费用,给患者带来巨大的经济压力;另一方面,膀胱癌具有很高的复发率,相当一部分非肌层浸润性膀胱癌在复发时,其分期和分级升高,并且约10%-20%发展成为肌层浸润性膀胱癌,这时只能通过根治性膀胱全切和尿流改道术来治疗。因此,尽早明确诊断和控制病情发展是膀胱癌治疗中的关键所在。尿液修饰核苷是一种可靠的肿瘤标记物,在多种肿瘤的早期诊断、病情评价和预后的评估方面具有十分重要的作用。我们之前的研究表明,m1A(1-甲基腺苷)和1-mel(1甲基次黄苷)联合检测具有很高的灵敏度(92.45%)和特异性(87.50%)。m1A58甲基转移酶(h Trm6P/h Trm61P)是体内产生m1A的一种蛋白酶,它是一种异源四聚体,由两个亚基组成。它能够把t RNA58位的腺苷(A)催化成1-甲基腺苷(m1A)。我们前期研究中发现,膀胱癌患者与正常人相比,其膀胱癌组织和尿液中的m1A水平均明显升高。h Trm61基因是m1A58甲基转移酶合成的必须基因之一,当敲除h Trm61基因后,m1A的表达水平降低。并且在筛选出高表达h Trm61基因的5637细胞株中,敲除h Trm61基因后,细胞的增殖受到抑制,凋亡增强。这说明h Trm61基因可能在膀胱癌的发病过程中有重要作用。本实验在前一步的基础上,进一步研究敲除h Trm61基因后5637细胞的侵袭能力的变化。把转染h Trm61-si RNA的5637细胞和转染空质粒的5637细胞送检做Affymetrix U133 plus 2.0 array芯片分析,以分析敲除h Trm61基因后,基因表达谱的差异基因,以此来研究敲除h Trm61后,可能影响到哪些信号通路。【方法】1化学合成h Trm61-si RNA、无效序列si RNA(Negative control)。实验分3组:实验组、阴性对照组、空白对照组。利用lipo2000分别将h Trm61-si RNA和无效序列si RNA瞬时转染至5637细胞株作为实验组和阴性对照组,不作任何处理的5637细胞株作为空白对照组。转染24h后,荧光定量PCR测定h Trm61基因的敲除效率;然后用TRANSWELLL测定敲除h Trm61后,对5637细胞侵袭的影响。2利用基因芯片检测hTrm61-siRNA转染至5637细胞株后相对于转染空质粒的5637细胞株的基因表达谱的改变,筛选出差异基因,利用PANTHER数据库对这些差异基因进行GO功能分析,并初步探究这些基因可能影响到那些通路【结果】1空白组细胞穿膜数为:76±4.6,阴性对照组细胞穿膜数为:74±5.2,实验组细胞穿膜数为:32±2.2。阴性对照组和空白组相比差异无统计学意义(P>0.05),实验组和空白对照组相比差异具有显著的统计学差异(P<0.05)。2基因芯片结果显示:按差异差异(Foldchange)≥2.0倍或者≤0.5倍为显著性差异标准,差异基因有2423个,其中上调的有1337个,下调的有1086个;若将差异显著性标准上调至5倍,则差异基因有419个,其中上调的有221个,下调的有198个。这些差异基因能够影响到许多信号通路。【结论】1膀胱癌细胞株5637中敲除h Trm61基因,发现膀胱癌5637细胞株的侵袭能力变弱,说明h Trm61基因能够增加细胞株5637的侵袭性。这提示我们h Trm61基因在膀胱癌的侵袭发生机制中可能起到重要作用。2初步构建沉默h Trm61基因的5637细胞相对于转染空质粒组的差异基因表达谱。3利用基因芯片技术,在敲除h Trm61基因组和空质粒组对比中发现了多达上千个差异基因的表达,这些差异基因涉及到许多信号通路,可能为下一步继续深究与膀胱癌有关的发生过程和机制打下基础。