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研究目的
通过对血吸虫病家兔肝纤维化组织及门静脉壁病理形态学观察，FN、LN、ERK1/2及C-fos表达的组织化学和分子生物学研究，初步探讨体外培育牛黄复方制剂对实验性血吸虫病家兔肝纤维化门静脉高压症的影响，观察体外培育牛黄复方制剂(In-vitrocultivatedcalculusboviscompoundpreparation，ICCBco)对肝纤维化的治疗作用，为进一步探讨其抗肝纤维化作用机制及选择有效治疗肝纤维化药物。
材料与方法
1.实验动物模型制备：选用成年雄性中国大耳白兔20只，体重1.5～2.2kg。随机取6只作为健康对照组；其余14只家兔采用腹部皮肤敷贴法感染血吸虫，笼养至40天时随机分为两组，模型对照组7只，ICCBco干预7只。其中ICCBco干预组加以ICCBco喂养，600mg/kg/d，一次喂服。
2.标本采集：家兔饲养至90d时，实验家兔经4％戊巴比妥钠50mg/1kg，腹腔注射麻醉，采集标本，保存备检。
3.研究方法
(1)ICCBco肝组织及门静脉壁病理形态学观察：采用HE染色，三色胶原染色及透射电镜观察各组组织学、胶原含量及组织病理学变化。
(2)ICCBco肝组织及门静脉壁Fibronectin及Laminin表达的研究：采用免疫组织化学方法对各组肝纤维化组织及门静脉壁组织切片进行FN，LN染色，显微图像分析仪分析FN及LN含量。
(3)ICCBco对肝纤维化门脉高压症门静脉壁ERK1/2及C-fos表达的研究：采用Westernblot检测各组冢兔门静脉血管组织ERK1/2活性及免疫组织化学法检测各组家兔门静脉血管壁c-fos表达，探讨ICCBco对血及虫病肝纤维化门静脉高压症血管病变的影响。
结果
1.病理学证实90d时模型组家兔肝表面呈灰褐色，组织变硬，被膜肿胀肝脏有大量肝脏表面密布灰色或灰黄色粟粒样虫卵结节，肝脏大量胶原沉积，符合肝硬化基本病理改变，肝纤维化造模成功。
2.ICCBco肝组织及门静脉壁病理形态学观察：
肉眼观察：模型组家兔肝表面呈灰褐色，组织变硬，被膜肿胀，肝脏表面密布灰色或灰黄色粟粒样虫卵结节，伴有的可见少量或中量腹水，脾脏肿大明显，门静脉及内脏静脉系统充血、扩张；ICCBCO治疗组，肝脏色呈暗红色，表面只见散在虫卵结节，没有腹水，脾肿大不明显，门静脉及内脏静脉充血扩张不明显。
HE染色：模型对照组家兔肝脏汇管区有大量虫卵肉芽肿形成，纤维组织增生明显，以汇管区为中心逐渐向肝小叶延伸，肝窦壁增厚，压迫窦腔，并包饶肝细胞；大量胶原纤维形成条束状纤维隔，重新分隔肝小叶；ICCBco干预组没有出现明显的纤维化和假小叶，肉芽肿较小且数目少；肝脏纤维结构存在，基本维持肝小叶结构，纤维成份局限于汇管区。
Pollak三色染色：ICCBco干预组：肝汇管区周围肝细胞间胶原纤维较模型组明显减少，门静脉平滑肌细胞间门静脉平滑肌细胞间见少量线状胶原纤维，与模型组比较明显减少。模型对照组肝组织及门静脉胶原纤维含量与健康对照组比较有显著差异性，P＜0.01，ICCBco干预组肝组织及门静脉胶原纤维含量明显减少，与模型对照组比较有显著差异性，P＜0.01。
透射电镜结观察：模型对照组肝窦内皮受损严重，细胞大多崩解，窦内可见肥大细胞，中性粒细胞、桨细胞及淋巴细胞浸润，毛细胆管扩张，肝细胞肝窦面的微绒毛减少或断裂，肝窦呈毛细血管化；肝细胞不同程度损伤，形态不规则，核染色质聚积，颜色变淡，胞桨内富含溶酶体及吞噬体，线粒体基质呈絮状变性，嵴消失或减少，内织网扩张，粗面内织网短而少，糖元较丰富；ICCBco
干预组家兔肝细胞核结构正常，核周围间隙清昕，粗面内织网排队列整齐。
3.ICCBco肝组织及门静脉壁Fibronectin及Laminin表达的研究：
显微图像分析及统计结果：ICCBco治疗组组FN表达(OD值)与模型对照组比较有显著差异，P＜0.0001。ICCBco治疗组肝组织及门静脉壁C组LN表达(OD值)明显减少，与模型对照组比较差异有显著统计学意义，P＜0.01。
4.ICCBco对肝纤维化门脉高压症门静脉壁ERK1/2及C-fos表达的研究：门静脉壁ERK1/2表达：血吸虫病模型组门静脉壁ERK1/2活性较正常对照明显增高一倍以上(P＜0.01)。ICCBco干预组的ERK1/2活性较血吸虫病模型组明显降低。
门静脉壁C-fos表达：ICCBco干预组与血吸虫病家兔组门静脉壁c-fos表达与模型对照组相比c-fos表达明显减弱(P＜0.01)。
结论
1.通过病理形态学观察，说明ICCBco可以保护和阻抑血吸虫病肝纤维化组织及门静脉壁病理变化的形成进程，有抗血吸虫病肝纤维化作用。
2.ICCBco能抑制肝组织及门静脉壁Fibronectin及Laminin表达，降低细胞外基质的沉积，发挥抗肝纤维化作用。
3.ICCBco干预组的ERK1/2活性较血吸虫病模型组明显降低。血吸虫病组门静脉壁pERK1/2光密度值较ICCBco干预组和正常对照组高2～3倍(P＜0.01)。说明ERKi/2及C-fos信号传导通路参与了血吸虫病肝纤维化门静脉血管平滑肌表型的转变，ICCBco的干预对防治血吸虫病肝纤维化门静脉高压症血管病变有治疗作用。