骨肉瘤是一种起源于间叶组织的原发性恶性骨肿瘤，好发于儿童和青少年，主要发病部位为长骨干骺端。由于患者发病初期无明显临床症状，并且骨肉瘤具有高度转移倾向，易发生肺转移,导致患者预后很差。目前骨肉瘤主要的治疗方法为化疗，但是不少患者对化疗药物耐药，加上转移性骨肉瘤对常规的化疗不敏感，使其临床疗效和长期生存率不佳，容易复发。近年来随着基因治疗的开展，人们发现基因在骨肉瘤中表达的情况不但决定了骨肉瘤的发生、发展和预后，而且也影响了其最终治疗的效果,寻找与骨肉瘤相关的新的基因治疗靶点成为研究骨肉瘤的一个热点。RanBP9是Ran蛋白在微管组织中心的结合蛋白，参与了微管成核现象。研究发现RanBP9广泛表达于不同组织和细胞系，并且作为一个支架蛋白与多种受体蛋白相互作用，参与细胞内信号转导途径：RanBP9参与了细胞周期的调控；调节凋亡前体活性影响细胞凋亡；参与神经系统和生殖系统的调节；参与启动细胞的免疫反应；并且RanBP9能抑制蛋白质泛素化，被认为是肿瘤细胞抑制因子。RanBP9在骨肉瘤中的表达情况及其发挥的生物学作用到底是什么？它是否能够成为控制骨肉瘤细胞失巢凋亡抵抗和转移的新的基因治疗靶点？为了探讨上述问题，我们进行如下三个部分的实验：第一部分通过免疫组化染色、Real-time PCR、免疫荧光细胞染色和Western-blot方法检测RanBP9在骨肉瘤组织和骨肉瘤细胞株中的表达情况。第二部分通过慢病毒载体敲低并建立稳定低表达RanBP9的SaOS2细胞株，利用此细胞株建立体内和体外实验模型，通过MTT、细胞克隆形成、细胞划痕实验、Transwell实验、裸鼠成瘤、免疫组化染色等方法研究敲低RanBP9的表达对骨肉瘤细胞生物学功能的影响，探讨RanBP9在骨肉瘤中发挥的功能作用。第三部分在第一、二部分对RanBP9在骨肉瘤中表达及功能作用研究的基础上，初步探讨RanBP9与骨肉瘤失巢凋亡抵抗的关系，进一步明确其在骨肉瘤转移中发挥的作用。实验主要结果及结论如下：1．RanBP9在骨肿瘤组织(骨肉瘤、骨巨细胞瘤)和骨肉瘤细胞株中均呈阳性表达，表达量的强弱与骨肿瘤组织和细胞的恶性程度呈负相关，表明RanBP9可能参与了骨肉瘤的发生过程。2．敲低RanBP9的表达后骨肉瘤细胞的增殖能力、克隆形成能力、裸鼠成瘤能力均增强，而凋亡被抑制，表明RanBP9可能参与了骨肉瘤的发展过程。3．RanBP9在骨肉瘤细胞失巢凋亡抵抗模型中低表达，而且敲低RanBP9的表达后骨肉瘤细胞的迁移和侵袭能力增强，表明RanBP9可能通过参与骨肉瘤细胞失巢凋亡的调控过程从而影响骨肉瘤的转移。综上所述，RanBP9广泛表达于骨肉瘤组织和细胞株，并且敲低RanBP9的表达不但增强了骨肉瘤细胞的增殖和转移能力，而且抑制了骨肉瘤细胞的凋亡, RanBP9可能作为一个抑癌基因参与了骨肉瘤的发生与演进。