前言 糖尿病(Diabetes mellitus DM)是一种严重危害人类健康的疾病。研究认为,慢性高血糖引起体内各种糖基化蛋白的过量堆积,形成糖基化终末产物(Advanced Glycation Endproducts AGEs)。糖基化终末产物的增加是造成糖尿病血管病变的主要因素。目前研究较为广泛的是糖基化终末产物与细胞膜上的特异受体(Receptor for Advanced Glycation Endproducts RAGE)结合,并激活下游信号传导途径,促进糖尿病血管并发症的发生发展。众多信号途径中,核转录因子-κB(Nuclear Factor-κB NF-κB)及其下游细胞因子的激活在糖尿病大血管及微血管并发症的发展中起重要作用。目前,关于糖基化终末产物对微血管内皮细胞分泌炎性介质机制的研究较少。本实验在体外培养大鼠心脏微血管内皮细胞(Cardiac Microvascular Endothelial Cells CMECs),研究糖基化终末产物对微血管内皮细胞NF-κB及环氧合酶-2(Cyclooxygenase-2 COX-2)表达的影响,进而探讨糖基化终末产物与糖尿病血管病变间的关系。 方法 采用改进的Nishida方法体外培养CMECs并进行鉴定。待细胞生长至亚融合状态后施加实验因素,分别以不同浓度糖基化牛血清白蛋白(BSA-AGE)(25,50,100,200mg/L)作用24小时;相同浓度BSA-AGE(100mg/L)作用不同时间(6,12,24,48h)。提取胞浆及核蛋白,采用Western Blot法检测NF-κB及COX-2蛋白的表达,结果进行灰度分析,对比各组间蛋白表达的差异并进行统计学分析。