肺癌的预后取决于早期筛查、早期诊断以及早期、有效的治疗,细胞病理学检测是肺癌早期诊断、疾病分期和疗效监测的重要手段。但由于灵敏性尚难以达到人们对肺癌早期诊断的要求,一直困挠着临床。挖掘更灵敏的标志物和更简便快捷的检测方法,成为研究热点之一。研究表时几乎所有人肺癌细胞株及大多数肺癌组织均有端粒酶的表达,并随肿瘤发展阶段呈进行性升高趋势,提示端粒酶活性在肺癌的发生及肿瘤的发展中有着重要的作用。本研究利用荧光标记的置换探针(displacing probe)建立一种实时荧光-端粒酶重复扩增(TRAP)法,并应用于肺癌细胞系、肺癌冰冻组织和临床体液样本。结果显示,实时荧光TRAP法具有简便、快速、灵敏、精确的优势,其灵敏性可达到0.5％。对83例肺癌组织和20例肺良性病变样本的检测结果表明,端粒酶活性是鉴别肺良、恶性病变的可靠指标。端粒酶活性在不同肺癌组织学类型之间具有显著差异,复合型小细胞癌活性较高,鳞癌和腺鳞癌次之,腺癌的端粒酶活性较低。此外端粒酶活性与肺癌组织学类型及肿瘤分化程度呈相关性。复合型小细胞癌活性较高,鳞癌和腺鳞癌次之,腺癌的端粒酶活性较低。肿瘤分化程度越低,端粒酶活性越高。可见使用灵敏的实时荧光PCR定量检测端粒酶活性可作为肺癌诊断重要辅助手段,特别是对于可疑的病例,端粒酶检测是鉴别诊断和监测疗效的有效方法。　　 人端粒酶活性是由其逆转录酶(human telomerase reverse transcnptase,hTERT)催化亚基在转录水平进行调控,迄今为止在其逆转录酶基序(motif)已发现3个主要的缺失剪接位点。这些缺失体的表达水平及其对端粒酶活性的影响尚未完全阐明。本研究利用特异的置换探针,对肺癌细胞系和冰冻肺癌组织的hTERT及其缺失体的表达进行实时定量检测。4种肺癌细胞系均具有不同水平的端粒酶活性和hTERT转录体的表达。83例肺癌组织样本检测出不同表达水平的hTERT总转录体,相对表达量在0.35-647之间(中位值=9.30),但与端粒酶活性TPG值之间未见统计学相关性。此外,我们还对46例胸腔积液和23例支气管肺泡灌洗液样本进行端粒酶活性检测,并与常规涂片法的细胞学诊断做对比,同时利用剩余沉淀细胞进行琼脂-石蜡双包埋和免疫组织化学染色以进一步校正诊断。在48例细胞学诊断明确的样本中,有43例(89.58％)样本的端粒酶活性检测结果与细胞学诊断相一致。在利用免疫组化标记和综合临床病理资料的基础上,对细胞学诊断(特别是可疑病例)进行校正后,端粒酶活性检测的敏感性为82.14％,特异性为95.24％,若将细胞学诊断与端粒酶活性两者结合分析,敏感性和特异性分别提高至97.56％和100％。由此可见使用灵敏的实时荧光TRAP法检测端粒酶活性是提高体液样本细胞学诊断准确性的重要辅助手段,特别是对于细胞学诊断可疑的病例,端粒酶检测是鉴别诊断(对诊断不明的患者)和监测疗效(对临床用药的肿瘤患者)的有效方法。实时荧光PCR法定量检测端粒酶活性有助于肺癌患者早期诊断、鉴别诊断和疗效监测。