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背景:胃癌(gastric cancer)是起源于胃黏膜上皮的恶性肿瘤,是常见的消化道恶性肿瘤,严重危害人类的身体健康。由于胃癌早期无特异性症状,多数胃癌患者确诊时已经处于胃癌晚期,因而,胃癌患者的死亡率较高且预后不良。目前化疗是胃癌治疗的重要手段,5-氟尿嘧啶(5-FU)是临床上常用于治疗胃癌的化疗药物,但化疗期间胃癌细胞容易对5-FU产生抵抗,最终导致化疗失败。因此,寻找克服胃癌细胞化疗耐药性的治疗靶点对改善胃癌的化疗效果具有重要意义。环状RNA(Circular RNA,circ RNA)是一类具有共价环状闭合结构的单链RNA,circ RNA没有线状RNA的5’端帽子和3’端多聚腺苷酸尾巴结构,因此不易被核酸外切酶降解。多项研究表明circ RNA参与调节包括胃癌在内的多种恶性肿瘤的发生和发展。值得注意的是,近年来有研究发现circ RNA在肿瘤细胞化疗耐药性的发展过程中起重要作用。circ PVT1是circ RNA中的一种,多项研究表明circ PVT1的异常表达与癌症的发生和发展有着密切的关系。然而,circ PVT1在胃癌5-FU耐药性发生发展过程中的作用至今尚不清楚。目的:本课题通过在5-FU耐药胃癌细胞中沉默circ PVT1,探讨circ PVT1对胃癌细胞5-FU敏感性的作用,并初步探讨其分子作用机制,为circ PVT1作为胃癌抗药性靶向治疗的新靶点提供实验依据和理论支持。方法:收集对5-FU敏感或者抵抗胃癌患者的胃癌组织样本,采取荧光实时定量PCR检测circ PVT1的相对表达水平。同时,检测胃癌细胞BGC823和5-FU抵抗胃癌细胞BGC823/5-FU中circ PVT1的表达水平的差异。在BGC823/5-FU细胞中沉默circ PVT1,CCK-8法检测细胞活性,观察其对细胞活性的影响。使用不同浓度(0、1、2、4、8、16和32μM)的5-FU处理BGC823/5-FU细胞并利用CCK-8实验分析细胞活性,以选择后续试验的5-FU剂量。将体外培养的BGC823/5-FU细胞分为如下四组:正常(control)组、5-Fu(16μM)组、5-Fu(16μM)+si-circ PVT1组及5-Fu(16μM)+si-negative control(NC)组。采用CCK-8试剂盒、克隆形成实验、TUNEL细胞凋亡检测试剂盒、流式细胞仪检测沉默circ PVT1对BGC823/5-FU细胞的活性、克隆增殖能力和凋亡的影响。荧光实时定量PCR和免疫蛋白印迹法检测Bcl-2、Bax和caspase-3 m RNA和蛋白的表达水平。结果:1.circ PVT1在5-FU抵抗患者胃癌组织中的表达水平明显高于circ PVT1在5-FU敏感患者胃癌组织中的表达水平。2.circ PVT1在BGC823/5-FU细胞中的表达水平明显高于BGC823细胞中的表达水平,与circ PVT1在5-FU抵抗胃癌组织和5-FU敏感胃癌组织中的表达水平相一致。3.BGC823/5-FU细胞活性随5-FU浓度的升高而降低,当5-FU浓度为16μM时细胞活性显著下降,作为后续研究的给药浓度。4.si-circ PVT1-1与si-circ PVT1-2均能显著降低circ PVT1的表达水平,si-circ PVT1-1沉默效率更高,作为沉默circ PVT1的序列。5.沉默circ PVT1增强5-FU对BGC823/5-FU细胞的克隆抑制作用。6.沉默circ PVT1增强5-FU对BGC823/5-FU细胞的凋亡促进作用。7.沉默circ PVT1通过调控Bcl-2、Bax和caspase-3相关m RNA增强5-FU对BGC823/5-FU细胞凋亡的促进作用。8.沉默circ PVT1通过调控Bcl-2、Bax和caspase-3相关蛋白增强5-FU对BGC823/5-FU细胞凋亡的促进作用。结论:沉默circ PVT1可以通过调控Bcl-2、Bax和caspase-3的表达增强BGC823/5-FU细胞对5-FU的敏感性。