肾上腺髓质素基因转染的骨髓间充质干细胞缺氧共培养对新生大鼠心肌细胞凋亡的影响

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[目的]研究肾上腺髓质素(ADM)基因转染的骨髓间充质干细胞(MSCs)缺氧共培养对新生大鼠心肌细胞凋亡的影响。[方法]贴壁法体外分离、扩增培养大鼠骨髓间充质干细胞。用x-gal染色测含肾上腺髓质素基因的重组腺病毒(Ad-ADM)对骨髓间充质干细胞感染率。乳鼠心肌细胞分离、纯化、培养与鉴定。乳鼠心肌细胞缺氧、无血清条件下培养3、6、12、24小时并检测其凋亡率。用Transwell小室缺氧、无血清条件下共培养骨髓间充质干细胞和乳鼠心肌细胞,24小时后检测共培养体系上清液中肾上腺髓质素含量并检测乳鼠心肌细胞凋亡率。实验分组为:Ad-ADM转染共培养组,Ad-Null转染共培养组,wildtype共培养组,同时设置单独乳鼠心肌细胞缺氧、无血清培养组。[结果]重组腺病毒对骨髓间充质干细胞的转染率与病毒感染复数(MOI)具有量效关系,MOI为150时细胞的感染率达95.4%。在缺氧、无血清培养条件下,乳鼠心肌细胞在缺氧3h、6h、12h、24h的凋亡率逐步升高,各时间点凋亡率差异具有统计学意义(P<0.001)。三组共培养体系中乳鼠心肌细胞凋亡率明显低于单独乳鼠心肌细胞缺氧培养组(P<0.05);Ad-ADM转染共培养组乳鼠心肌细胞凋亡率低于空载体转染、共培养组和未转染、共培养组(P<0.05)。空载体转染、共培养组和未转染、共培养组相比,乳鼠心肌细胞凋亡差异未达到统计学意义。肾上腺髓质素基因转染共培养组的上清液中肾上腺髓质素分泌量高于空载体转染共培养组和未转染共培养组(P<0.05)。空载体转染共培养组与未转染共培养组相比,肾上腺髓质素差异未达到统计学意义。[结论]与骨髓间充质干细胞共培养可以降低缺氧、无血清培养条件下乳鼠心肌细胞的凋亡率。与未转染的骨髓间充质干细胞相比,在缺氧、无血清培养条件下(24小时),肾上腺髓质素基因转染可以增强共培养对乳鼠心肌细胞的凋亡的影响,这可能与肾上腺髓质素表达增加有关。
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