目的:研究空肠弯曲菌(C.jejuni)经KM雄鼠消化道连续传代分离后,细菌的形态学、生长速度和运动能力等相关毒力因子致周围神经病能力的变化。以期获得毒力增强且稳定遗传的C.jejuni菌株,提高C.jejuni致周围神经病动物模型的发病率,进一步改良此模型,同时也为研究C.jejuni致周围神经病致病机理提供实验数据。方法:复苏C.jejuni lulei株,多种方法鉴定后,将P4代作为攻毒菌株并制成3×108cfu/ml菌悬液,经口灌胃攻毒4周龄清洁级昆明(KM)雄鼠,分别取24小时、48小时粪便分离培养C.jejuni分离株,用得到的新一代24小时分离菌株继续攻毒新一批小鼠,照此方法连续传代十八代。通过对小鼠一般情况的观察,对每代不同时间点分离株进行形态学对比,生长速度测定以及细菌动力实验,观察其毒力因子变化致病能力的影响。结果:1 C.jejuni lulei株成功复苏,经革兰染色后鉴定为革兰阴性,光镜下观察呈红色棒状或逗点状杆菌,部分细菌可见螺旋形;马尿酸钠水解实验鉴定呈阳性、深紫色;经多重PCR鉴定弯曲菌属特异的16S片段阳性,可见857bp条带;C.jejuni种属特异的mapA片段阳性,可见589bp条带;2攻毒前取小鼠粪便未分离出C.jejuni,说明实验动物昆明小鼠无C.jejuni感染;3本实验成功连续传代十八代,其中,24小时分离株从第一代就成功分离出一株,菌株分离率从第八代开始比较稳定,达50%以上;而48小时分离株则从第七代才开始得到,且从第十代开始达到稳定,分离率在50%以上;4对每代C.jejuni分离株进行革兰染色,在高倍光镜下观察其形态。随着代数的增加,细菌的形态逐渐由短小形过渡到细长形,个别C.jejuni形态可呈现“C”型或“S”型,螺旋更加明显;5 24小时、48小时C.jejuni分离株生长速度呈增长趋势,分别于第十八代、第十三代达到目前最高值且24小时大于48小时,但48小时生长速度大部分高于同代24小时生长速度。使用SPSS 13.0统计软件包进行Kruskal Wallis检验、LSD分析及单样本数t检验发现:24小时、48小时生长速度高于原代生长速度且存在差异。两个分离点各代之间存在差异,24小时生长速度从第八代开始生长速度出现明显变化。48小时生长速度从第七代开始出现明显变化。(P<0.05);6 C.jejuni分离株动力实验大致呈增长趋势,24小时分离株于第十八代达到最大,48小时分离株于第九代达到最大值。使用Kruskal Wallis Test分析:24小时、48小时菌环直径各代之间有差异。24小时原代与第五代以后菌株差异明显。(P<0.05);7实验中未发现腹泻或瘫痪,甚至死亡的小鼠,Weaver,s评分均为0分;粪便观察布里斯托评分第四型、第五型,未观察到糊状便及水样便。C.jejuni lulei株经KM雄鼠消化道传代毒力增强,且十八代小鼠共108只均未出现临床症状,说明KM雄鼠可作为C.jejuni lulei株的活体培养基,具有稳定性、可重复性、非致死性。结论:1 KM雄鼠可作为空肠弯曲菌lulei株的活体培养基。2 C.jejuni经小鼠消化道连续传代后,分离率逐渐趋于稳定,且随着代数增加,分离株生长速度、菌环直径均呈增长趋势。同代48小时分离株毒力强于24小时分离株。3细菌形态变化趋势为由短小形逐渐过渡到细长形;相同分离时间点的菌株,随着生长速度增快,形态由短小变细长;不同分离时间点菌株的生长速度与形态无相关关系。4 24小时分离株于第八代开始出现毒力增强且稳定遗传,48小时分离株于第七代毒力明显增强且稳定遗传。