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背景与目的肺癌是当今世界上对人类健康与生命威胁最大的恶性肿瘤。在我国因为大气污染等问题日趋严重,肺癌的发病率逐年上升,如果不采取及时有效的控制措施,预计到2025年,我国将成为世界第一肺癌大国。肺癌因具有易侵袭与转移的特点,其5年生存率仅为12-16%。因此,如果能够更清晰地了解其侵袭与转移的具体机制,并采取相应的预防及治疗措施,对于提高肺癌的治疗效果具有重大的临床意义及社会意义。肺癌侵袭转移是一个复杂连续、多步骤、渐进式多基因的过程。最新研究表明肿瘤微环境对肿瘤转移有巨大影响,肿瘤微环境最主要的特征为缺氧和酸性环境,酸性环境主要由肿瘤代谢重塑而导致乳酸在胞外积累,乳酸的不断积累与肿瘤的转移有着密切的联系,而作为肿瘤转移的一个早期事件——EMT可能会受到乳酸积累的影响,Snail是已知可以调节上皮细胞标志蛋白的一个关键转录因子。研究发现Hippo信号通路中的共转录激活子TAZ可以激活多种原癌基因的表达,在肿瘤侵袭转移过程中扮演了重要的角色,为抗癌药物提供了新的分子靶点,成为癌症研究新热点。c-Jun氨基末端激酶(JNK)的活化在多种人类疾病的发生与发展中起着至关重要的作用,研究发现JNK与肿瘤转移有关。信号传导与转录激活因子-3(STAT3)是转录因子家族中的一员,STAT3持续活化与多种肿瘤有关,可以促进转移的发生。本研究就乳酸如何影响转录因子Snail的表达来调节肿瘤细胞EMT及TAZ、JNK、STAT3在其中的作用进行深入探讨,阐明肿瘤转移的分子机制,为肿瘤治疗提供新的分子靶点和思路。材料与方法选人非小细胞肺腺癌细胞A549与H1299作为研究对象。⑴在A549、H1299内转染TAZ c DNA,Western blot检测转染效率及Snail、p-STAT3、p-JNK表达水平的变化。⑵在A549、H1299内转染TAZ si RNA,Western blot检测转染效率及Snail、p-STAT3、p-JNK表达水平的变化。⑶在A549、H1299内转染TAZ c DNA,TAZ si RNA,TAZS89A c DNA,pc DNA,Snail Promoter以及海肾萤光素酶启动子CMV,应用Dual-Luciferase Reporter Assay Systerm检测细胞内Snail Promoter的表达水平。⑷在A549、H1299中,共转TAZ c DNA、TAZS89A c DNA和Dominant Negative STAT3 c DNA(STAT3 DN c DNA),Western blot检测转染效率及Snail表达水平的变化。⑸在A549、H1299内共转TAZ c DNA、TAZS89A和Dominant Negative STAT3 c DNA(STAT3 DN c DNA),Snail Promoter以及海肾萤光素酶启动子CMV,应用Dual-Luciferase Reporter Assay Systerm检测细胞内Snail Promoter的表达水平。⑹在A549、H1299内转染TAZ c DNA 48h后,用不同的信号通路抑制剂处理3h后,Western blot检测转染效率及p-STAT3、Snail表达水平的变化。结果1、TAZ c DNA转染后,TAZ蛋白较对照组表达上升,CTGF、p-JNK、p-STAT3、EMT标志物Snail蛋白也明显上升,并随乳酸浓度上升而上升。2、TAZ si RNA转染后,TAZ蛋白较对照组表达下降,CTGF、p-JNK、p-STAT3、EMT标志物Snail蛋白也明显降低,并随乳酸浓度上升而上升。3、用Promega公司的GLO MAX仪器检测Snail Promoter水平显示,TAZ si RNA与对照组相比明显降低,TAZ c DNA,TAZS89A c DNA较对照组显著升高(A549:p=0.020,0.021,0.017;H1299:p=0.006,0.001,0.000)。4、共转TAZ c DNA、TAZS89A c DNA和Dominant Negative STAT3 c DNA(STAT3 DN c DNA)发现,STAT3 DN c DNA显著降低了TAZ对Snail的促进作用。5、用Promega公司的GLO MAX仪器检测Snail Promoter水平显示,TAZ c DNA,TAZS89A c DNA较对照组显著升高,共转pc DNA+STAT3 DN c DNA,TAZ c DNA+STAT3 DN c DNA,TAZS89A c DNA+STAT3 DN c DNA较对照组显著降低(A549:p=0.0016,0.0024,0.0023,0.0021,H1299:p=0.0025,0.0031,0.0019,0.0018)。6、转染TAZ c DNA后,用JNK通路抑制剂SP600125处理后,p-TAZ、CTGF没变化,p-STAT3活性降低,Snail水平下降,其它抑制剂处理没有此趋势。结论1、STAT3促进TAZ上调Snail表达。2、JNK通路参与了TAZ诱导STAT3促进Snail的过程。3、乳酸通过TAZ/JNK/STAT3信号通路诱导肺腺癌细胞上皮间质转化。