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蝴蝶兰(Phalaenopsis)是当前国际花卉市场上最重要的花卉之一。它为春化型植物,即必须要有一定的低温处理才可以开花。本文采用蛋白质组学技术研究了不同时间的低温处理后,蝴蝶兰花芽发育过程中蛋白质差异表达的变化情况。
1.建立了蝴蝶兰花芽蛋白双向电泳体系:对样品制备,IPG胶条的pH值范围等进行了优化:采用酚抽提法提取蛋白;样品与水化液1∶40复溶;被动水化,上样量为1.35mg,等点聚焦程序B1,选用24cm pH值3-10NL胶条和12%的凝胶分离蛋白;采用考马斯亮蓝G-250染色,获得了可识别1200个蛋白质斑点的双向电泳图谱,且重复性好、分辨率高。
2.研究了低温处理后,蝴蝶兰花芽发育过程中蛋白质差异表达的变化情况。结果表明:低温处理后发现45个差异表达的蛋白质点,其中上调表达的8个,下调表达的28个,波动表达的5个,具有质的变化蛋白点有4个。对45个差异显著蛋白质斑点进行基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱串联质谱分析,共获得31个较好的二级质谱图,通过数据库搜索,其中有25个蛋白质功能得到了鉴定。这些蛋白质主要与物质和能量代谢,应激响应,蛋白质降解,蛋白质合成,细胞内外信息传递等生物学功能相关。