目的:本研究致力于构建一株减毒且免疫原性高的痘苗病毒载体。方法:通过同源重组技术删除痘苗病毒天坛株的TK2L-TC7L基因,利用EGFP和Cre/Lox P重组系统筛选基因缺失痘苗病毒TK/TC VTT。体外实验中,痘苗病毒TK/TC VTT和VTT通过结晶紫染色和MTS检测分析扩散能力和细胞毒性。体内实验中,通过鼻腔和颅内注射对比小鼠体重变化和死亡率分析基因缺失病毒TK/TC VTT的体内毒力;以及特异性抗体水平和T细胞增殖分析TK/TC VTT的免疫原性。结果:成功构建了基因缺失痘苗病毒TK/TC VTT,TK2L-TC7L基因缺失不影响病毒的正常复制且遗传稳定性好,而且显著减弱了病毒毒力并有效诱导机体的免疫应答。结论:本研究为未来医学领域提供了一种减毒、高效的痘苗病毒载体疫苗。