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目的:查阅文献,确定可能与湿疹发病机制有关的miR-124,再通过QPCR技术检测并验证湿疹皮损中miR-124的表达水平,探讨miR-124与NF-kB通路相互调节的机制,为湿疹早期诊治提供思路。同时观察清热燥湿类中药提取物对其干预后miR-124的差异表达,探索中医中药治疗湿疹的作用机制,为中医中药防治湿疹提供客观依据。方法:(1)召集3 7名例湿疹患者取其湿疹皮损区和3 7名健康志愿者的皮肤组织,并用Trizo法提取RNA,检测总量,再通过QPCR实验检测并验证湿疹组织中miR-1 24的表达水平;(2)在炎症因子刺激的Hacat细胞中验证前面结果,并筛选出与此结果有显著关联的炎症因子;(3)在Hacat细胞中转染miR-124模拟物(mimic)、miR-124抑制剂(i n h i b i t o r)及阴性对照组,通过实时荧光定量P C R验证m i R-124上调与下调,并使用蛋白免疫印迹等手段分析调控miR-124对p65表达的影响;(4)在Hacat细胞、TNF-α刺激的Hacat细胞、INF-γ刺激的Hacat细胞三个实验组及空白对照组中分别添加miR-124,QPCR 检测与 P65 相关基 因和趋化因子的蛋白 表达;转染 miR-124 模拟物(mimic)、miR-124 抑制剂(inhibitor)及阴性对照组,利用蛋白免疫印记法验证miR-124和p65回复对下游基因表达的影响;(5)通过实时荧光定量PCR技术检测下游基因在正常组织和湿疹组织中的表达以及与miR-124表达的相关性。(6)将清热燥湿类中药提取物添加至Hacat细胞、TNF-α刺激的Hacat细胞、INF-γ刺激的Hacat细胞中,再进行QPCR检测miR-124的表达水平、蛋白免疫印记法检测其蛋白的表达。结果:湿疹组织中miR-124表达呈下调趋势,差异有显著意义(P<0.01);炎症细胞因子刺激Hacat细胞后,miR-124表达下降,其中TNF-α、INF-γ组下调最明显,P<0.01,差异有显著意义;miR-124与p65靶向结合,上调或下调miR-124影响p65蛋白的表达,上调miR-124后p65蛋白下降,下调miR-124后p65蛋白上升,P<0.01,差异有显著意义;TNF-α、INF-γ刺激细胞后,添加miR-124后,在与NF-kB相关的基因和趋化因子相关基因中IL8、CCL8、CCL5三个基因有明显差异,P<0.01,差异有显著意义;湿疹组织中P65、IL8、CCL5、CCL8的表达均上调,P<0.01,差异有显著意义,并与miR-124表达水平呈负相关;清热燥湿类中药中白鲜皮、地肤子、苦参的提取物对miR-124有上调作用,P<0.01,差异有显著意义。结论:1、湿疹组织中miR-124的表达水平呈下调趋势;miR-124表达与NF-kB为相互抑制、负反馈调节关系,通过上调miR-124表达可以抑制NK-kB通路的活性,减少了 NF-kB通路下游的炎症因子的产生,从而防止了湿疹炎症的发生。2、特异性下调的miR-124在经过清热燥湿类中药提取物干预后表达显著上调,说明清热燥湿类中药可能通过调节特异性miR-124的表达来实现其治疗作用。3、为下一步开展湿疹miRNA靶基因及分子标志物研究提供实验依据。