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背景：
熊果酸(Ursolic Acid,UA)是存在于天然植物中的一种五环三萜类化合物，具有多种药理作用，在抗肿瘤、抗心血管疾病以及保肝作用方面尤其显著。有研究表明熊果酸对胆汁淤积型肝损伤有一定的保护作用，但其保肝作用的详细机制尚不明确。体内胆汁酸主要经肝脏UGT2B7代谢后由胆道BSEP与MRP2共同转运排泄，而UGT2B7、BSEP、MRP2的表达受Nrf2调控，且文献表明熊果酸(UA)对核受体Nrf2有明确的激活作用。因此，熊果酸很有可能通过激活核受体Nrf2、上调UGT2B7、BSEP、MRP2基因表达来促进胆汁酸外排，从而减轻肝细胞损伤来发挥保肝作用。课题组前期研究也表明，熊果酸(UA)能显著上调HepG2细胞中核受体Nrf2、代谢酶UGT2B7以及转运体BSEP、MRP2的mRNA和蛋白水平，且MRP2的表达受Nrf2的调控。故在大鼠体内进一步探究熊果酸保肝的作用机制是有实际意义的。
目的：
本实验采取α-萘基异硫氰酸酯(α-napthylisothiocyanate,ANIT)诱导的肝损伤雄性SD大鼠为模型，探索熊果酸对肝损伤大鼠中核受体Nrf2、代谢酶UGT2B7、转运体BSEP和MRP2通路的调节作用，为在临床上使用熊果酸这一药物的保肝作用提供理论基础。
方法：
1.将30只雄性SD大鼠随机分成五组：Control组；ANIT(60mg/kg)模型组；ANIT+UA(10mg/kg)低剂量组；ANIT+UA(20mg/kg)中剂量组；ANIT+UA(40mg/kg)高剂量组。灌胃给药14天后，麻醉解剖：
1)下腔静脉采血，离心取血清，运用全自动生化分析仪检测血清指标：丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、γ-谷氨酰转移酶(γ-GT)、总胆红素(T-BIL)、直接胆红素(D-BIL)和总胆汁酸(TBA)的浓度；
2)取肝脏进行HE染色，分析不同组别的肝脏病理状态。
2.将21只雄性SD大鼠随机分成三组：Control组；ANIT(60mg/kg)模型组；ANIT+UA(40mg/kg)给药组。灌胃给药14天后，解剖取肝脏，提取肝组织中的RNA和蛋白，通过Rt-QPCR、Westernblotting，考察UA对核受体Nrf2、代谢酶UGT2B7和转运体BSEP、MRP2的mRNA和蛋白的表达的影响。
3.将24只雄性SD大鼠随机分成三大组：Control组；ANIT(60mg/kg)模型组；ANIT+UA(40mg/kg)给药组。每个大组内再分为沉默Nrf2慢病毒组和阴性对照的空载慢病毒组两个小组。慢病毒感染21天后，麻醉解剖取肝脏：
1)尾静脉注射慢病毒；
2)提取肝组织中的RNA和蛋白，通过Rt-QPCR、Westernblotting，在沉默Nrf2的肝损伤大鼠中进一步探究UA对代谢酶UGT2B7和转运体BSEP、MRP2的mRNA和蛋白的表达的影响及其与核受体Nrf2的关联性。
结果：
1.与正常对照组相比，ANIT模型组显著性升高了大鼠血清指标ALT、AST、ALP、γ-GT、T-BIL、D-BIL和TBA的水平；与模型组相比，熊果酸以剂量依赖性方式降低肝损伤大鼠血清ALT、AST、ALP、γ-GT、T-BIL、D-BIL和TBA指标的水平；组织学评估也清楚的表明了UA预给药可以显著减轻ANIT引起的肝脏病理损伤。
2.与正常对照组相比，ANIT模型组显著下调了核受体Nrf2、代谢酶UGT2B7和转运体BSEP、MRP2的mRNA和蛋白水平；UA预给药后，显著上调ANIT诱导的肝损伤大鼠中核受体Nrf2、代谢酶UGT2B7和转运体BSEP、MRP2的mRNA和蛋白水平mRNA和蛋白的表达。
3.在沉默Nrf2的肝损伤大鼠模型中，与注射空载慢病毒的阴性对照组相比，UA对肝损伤大鼠的核受体Nrf2、代谢酶UGT2B7和转运体BSEP、MRP2mRNA和蛋白水平的上调作用均有显著性下降。
结论：
1.熊果酸对ANIT所致的肝损伤具有一定的保护作用。
2.熊果酸能显著上调肝损伤大鼠中核受体Nrf2、代谢酶UGT2B7和转运体BSEP、MRP2的表达。
3.熊果酸的保肝作用可能是通过激活核受体Nrf2，从而上调下游靶基因UGT2B7、BSEP、MRP2来实现的。
熊果酸(Ursolic Acid,UA)是存在于天然植物中的一种五环三萜类化合物，具有多种药理作用，在抗肿瘤、抗心血管疾病以及保肝作用方面尤其显著。有研究表明熊果酸对胆汁淤积型肝损伤有一定的保护作用，但其保肝作用的详细机制尚不明确。体内胆汁酸主要经肝脏UGT2B7代谢后由胆道BSEP与MRP2共同转运排泄，而UGT2B7、BSEP、MRP2的表达受Nrf2调控，且文献表明熊果酸(UA)对核受体Nrf2有明确的激活作用。因此，熊果酸很有可能通过激活核受体Nrf2、上调UGT2B7、BSEP、MRP2基因表达来促进胆汁酸外排，从而减轻肝细胞损伤来发挥保肝作用。课题组前期研究也表明，熊果酸(UA)能显著上调HepG2细胞中核受体Nrf2、代谢酶UGT2B7以及转运体BSEP、MRP2的mRNA和蛋白水平，且MRP2的表达受Nrf2的调控。故在大鼠体内进一步探究熊果酸保肝的作用机制是有实际意义的。
目的：
本实验采取α-萘基异硫氰酸酯(α-napthylisothiocyanate,ANIT)诱导的肝损伤雄性SD大鼠为模型，探索熊果酸对肝损伤大鼠中核受体Nrf2、代谢酶UGT2B7、转运体BSEP和MRP2通路的调节作用，为在临床上使用熊果酸这一药物的保肝作用提供理论基础。
方法：
1.将30只雄性SD大鼠随机分成五组：Control组；ANIT(60mg/kg)模型组；ANIT+UA(10mg/kg)低剂量组；ANIT+UA(20mg/kg)中剂量组；ANIT+UA(40mg/kg)高剂量组。灌胃给药14天后，麻醉解剖：
1)下腔静脉采血，离心取血清，运用全自动生化分析仪检测血清指标：丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、γ-谷氨酰转移酶(γ-GT)、总胆红素(T-BIL)、直接胆红素(D-BIL)和总胆汁酸(TBA)的浓度；
2)取肝脏进行HE染色，分析不同组别的肝脏病理状态。
2.将21只雄性SD大鼠随机分成三组：Control组；ANIT(60mg/kg)模型组；ANIT+UA(40mg/kg)给药组。灌胃给药14天后，解剖取肝脏，提取肝组织中的RNA和蛋白，通过Rt-QPCR、Westernblotting，考察UA对核受体Nrf2、代谢酶UGT2B7和转运体BSEP、MRP2的mRNA和蛋白的表达的影响。
3.将24只雄性SD大鼠随机分成三大组：Control组；ANIT(60mg/kg)模型组；ANIT+UA(40mg/kg)给药组。每个大组内再分为沉默Nrf2慢病毒组和阴性对照的空载慢病毒组两个小组。慢病毒感染21天后，麻醉解剖取肝脏：
1)尾静脉注射慢病毒；
2)提取肝组织中的RNA和蛋白，通过Rt-QPCR、Westernblotting，在沉默Nrf2的肝损伤大鼠中进一步探究UA对代谢酶UGT2B7和转运体BSEP、MRP2的mRNA和蛋白的表达的影响及其与核受体Nrf2的关联性。
结果：
1.与正常对照组相比，ANIT模型组显著性升高了大鼠血清指标ALT、AST、ALP、γ-GT、T-BIL、D-BIL和TBA的水平；与模型组相比，熊果酸以剂量依赖性方式降低肝损伤大鼠血清ALT、AST、ALP、γ-GT、T-BIL、D-BIL和TBA指标的水平；组织学评估也清楚的表明了UA预给药可以显著减轻ANIT引起的肝脏病理损伤。
2.与正常对照组相比，ANIT模型组显著下调了核受体Nrf2、代谢酶UGT2B7和转运体BSEP、MRP2的mRNA和蛋白水平；UA预给药后，显著上调ANIT诱导的肝损伤大鼠中核受体Nrf2、代谢酶UGT2B7和转运体BSEP、MRP2的mRNA和蛋白水平mRNA和蛋白的表达。
3.在沉默Nrf2的肝损伤大鼠模型中，与注射空载慢病毒的阴性对照组相比，UA对肝损伤大鼠的核受体Nrf2、代谢酶UGT2B7和转运体BSEP、MRP2mRNA和蛋白水平的上调作用均有显著性下降。
结论：
1.熊果酸对ANIT所致的肝损伤具有一定的保护作用。
2.熊果酸能显著上调肝损伤大鼠中核受体Nrf2、代谢酶UGT2B7和转运体BSEP、MRP2的表达。
3.熊果酸的保肝作用可能是通过激活核受体Nrf2，从而上调下游靶基因UGT2B7、BSEP、MRP2来实现的。